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暗黑鳃金龟UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(UAP)基因的克隆、原核表达及功能分析
文献摘要：
[目的]本研究旨在阐明暗黑鳃金龟Holotrichia parallela UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(UAP)基因HpUAP的序列特征和功能.[方法]通过PCR方法从暗黑鳃金龟2龄幼虫中扩增HpUAP全长cDNA序列,并进行生物信息学分析;构建pET30a-HpUAP重组表达载体,转化大肠杆菌Escherichia coli BL21(DE3),IPTG诱导蛋白表达;利用qRT-PCR检测 HpUAP在暗黑鳃金龟幼虫不同发育阶段(1-3龄幼虫)和3龄第2天幼虫不同组织(体壁、中肠、直肠、回肠、马氏管和脂肪体)中的表达量.利用RNAi沉默暗黑鳃金龟2龄幼虫体内HpUAP基因后,观察其生长发育和存活情况,并测定RNAi 72 h后其HpUAP表达量和体壁几丁质含量.[结果]PCR扩增获得暗黑鳃金龟HpUAP全长cDNA序列(GenBank登录号:MW676788),开放阅读框长1 461 bp,编码486个氨基酸残基,蛋白分子量约为53.9 kD.系统进化分析发现HpUAP与似牛嗡蜣螂Onthophagus taurinus UAP的氨基酸序列以较高的置信度聚为一个分支.经IPTG诱导可表达53.9 kD的HpUAP蛋白,与预期大小一致.发育表达谱结果表明HpUAP在1龄第1天和3龄第1天暗黑鳃金龟幼虫中表达量较高,组织表达谱结果表明HpUAP在暗黑鳃金龟3龄第2天幼虫中肠和体壁中表达量较高.HpUAP RNAi导致暗黑鳃金龟2龄幼虫生长与行动缓慢,体表颜色加深并皱缩;RNAi处理72 h后,与对照组(dsGFP 注射组)相比,dsHpUAP注射组HpUAP表达量下降了93.06％,死亡率增加了40％左右,表皮几丁质含量下降了约29％.[结论]结果说明HpUAP参与几丁质代谢,在暗黑鳃金龟幼虫的生长发育过程中起关键作用.
文献关键词：
暗黑鳃金龟;几丁质;HpUAP;原核表达;组织表达谱;RNAi
中图分类号：
作者姓名：
刘兆瑞;吴涵;郭晓昌;李亚子;赵丹;郭巍
作者机构：
河北农业大学植物保护学院,河北保定071001;中国农业科学院研究生院,北京100081
文献出处：
引用格式：
[1]刘兆瑞;吴涵;郭晓昌;李亚子;赵丹;郭巍-.暗黑鳃金龟UDP-N-乙酰氨基葡萄糖焦磷酸化酶(UAP)基因的克隆、原核表达及功能分析)[J].昆虫学报,2022(05):568-576
A类：
parallela,HpUAP,MW676788,Onthophagus,taurinus,dsHpUAP
B类：
暗黑鳃金龟,UDP,乙酰氨基葡萄糖,焦磷酸,磷酸化酶,原核表达,功能分析,明暗,Holotrichia,序列特征,幼虫,全长,cDNA,生物信息学分析,pET30a,重组表达,表达载体,大肠杆菌,Escherichia,coli,BL21,DE3,IPTG,qRT,发育阶段,不同组织,体壁,中肠,回肠,马氏管,脂肪体,RNAi,虫体,存活情况,几丁质,GenBank,登录号,开放阅读框,bp,氨基酸残基,分子量,kD,系统进化分析,蜣螂,氨基酸序列,置信度,天暗,组织表达谱,致暗,皱缩,dsGFP
AB值：
0.242294
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