典型文献
bta-miR-377琼脂糖凝胶电泳条件优化
文献摘要：
bta-miR-377与下丘脑分泌的可卡因苯丙胺调节转录肽(Cocaine and amphetamine regulated transcript peptide,CART)存在靶向结合关系.为分析bta-miR-377在牛下丘脑组织中的表达情况,为后续探讨bta-miR-377与CART相互作用进而影响牛卵泡发育的作用机制奠定基础,经Trizol法提取牛下丘脑总RNA,采用茎环结构法设计特异性引物,并利用半定量RT-PCR技术克隆bta-miR-377,观察不同条件琼脂糖凝胶电泳后Marker和目的条带的分离情况,其中凝胶浓度为2.0％、2.5％;电压为100、80 V;时间为40、60、80 min;同时通过Image J软件对不同条件下获得的bta-miR-377条带进行灰度值分析,结合电泳结果确定最佳分离条件.结果显示,利用茎环结构法能够达到延长bta-miR-377片段的目的,且特异性强;凝胶浓度为2.5％、电压为80 V、时间为80 min时,bta-miR-377条带分离效果好且表达量高,该条件下条带的灰度值与其他组相比差异显著,与电泳分析结果一致,说明低浓度凝胶的分辨率低,长时间高压会导致DNA降解进而使条带弥散,而适当电压下电泳时间过短会使DNA分子无法聚集而使条带过宽,说明适宜的电泳条件是鉴定目的miRNA表达的关键.综上可见,bta-miR-377在牛下丘脑中有表达,丰富了动物生殖生理学中下丘脑-垂体-性腺轴的内分泌调控理论.
文献关键词：
bta-miR-377;茎环结构法;半定量RT-PCR;琼脂糖凝胶;条件优化
中图分类号：
作者姓名：
郝琴琴;任静;成俊丽;李鹏飞
作者机构：
山西农业大学 生命科学学院,山西 太谷 030801
文献出处：
引用格式：
[1]郝琴琴;任静;成俊丽;李鹏飞-.bta-miR-377琼脂糖凝胶电泳条件优化)[J].山西农业科学,2022(05):709-713
A类：
可卡因苯丙胺调节转录肽,茎环结构法
B类：
bta,琼脂糖凝胶电泳,条件优化,下丘脑,Cocaine,amphetamine,regulated,transcript,peptide,CART,脑组织,卵泡发育,Trizol,特异性引物,半定量,Marker,条带,离情,Image,不同条件下,带进,灰度值,分离条件,分离效果,该条,电泳分析,弥散,带过,miRNA,生理学,垂体,性腺轴
AB值：
0.228813
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