[目的]在甘蓝型油菜中克隆拟南芥MYB-CC家族转录因子At PHL12的同源基因BnPHL12并进行生物信息学、组织表达模式、亚细胞定位及转录活性研究,为BnPHL12的基因功能研究奠定基础.[方法]利用序列比对方法(BLAST)在甘蓝型油菜泛基因组数据库BnIR中鉴定AtPHL12的同源基因BnPHL12,在"Westar"品系中克隆AtPHL12的同源基因,进行生物信息学及进化分析.利用qRT-PCR及GUS染色方法检测AtPHL12同源基因在不同组织中的表达水平,利用原生质体转化的方法检测BnPHL12的亚细胞定位及转录活性.利用农杆菌侵染介导的转化方法,创建BnA01PHL12过量表达转化植株,并进行BnA01PHL12功能分析.[结果]在"Weatar"材料中克隆到4个AtPHL12的同源基因,命名为BnA01PHL12(705 bp),BnC01PHL12(705 bp),BnA05PHL12(705 bp)和BnC05PHL12(696 bp),分别编码234、234、234、231个氨基酸,与AtPHL12的序列相似性大于70％,均含有保守的MYB DNA结合结构域和Coiled-Coiled结构域.BnA01PHL12与BnC01PHL12分别来源于 白菜的BraA01t04110Z、甘蓝的BolC01g050170.2J.BnPHL12的同源基因在根、茎、叶、花蕾中均有表达,在根和叶的表达水平更高;BnA01PHL12与BnC01PHL12在花药发育的早期和晚期均有较高的表达水平.BnA01PHL12定位在细胞核中并具有转录激活活性.在甘蓝型油菜和拟南芥中,利用绒毡层特异表达基因BnA9启动子驱动BnA01PHL12表达,导致转基因材料雄性不育.[结论]在甘蓝型油菜中,AtPHL12的4个同源基因具有保守的MYB和CC结构域,在营养器官和生殖器官中均有表达.通过在绒毡层细胞中过量表达BnA01PHL12,创制了新的雄性不育材料,为研究花药发育提供良好基础.

甘蓝型油菜;AtPHL12;进化分析;亚细胞定位;组织表达分析;雄性不育

李兵;刘志全;王璐琳;胡建军;唐铭霞;戴成;王克秀;马朝芝

四川省农业科学院作物研究所,成都 610066;华中农业大学作物遗传育种国家重点实验室,武汉 430070;湖南省农业科学院蔬菜研究所,长沙 410125

西南农业学报

[1]李兵;刘志全;王璐琳;胡建军;唐铭霞;戴成;王克秀;马朝芝-.甘蓝型油菜BnPHL12基因克隆及功能分析)[J].西南农业学报,2022(07):1477-1490

BnPHL12,PHL12,BnIR,AtPHL12,BnA01PHL12,Weatar,BnC01PHL12,BnA05PHL12,BnC05PHL12,BraA01t04110Z,BolC01g050170,BnA9

甘蓝型油菜,基因克隆,功能分析,拟南芥,MYB,CC,同源基因,组织表达模式,亚细胞定位,转录活性,活性研究,基因功能,功能研究,序列比对,比对方法,BLAST,泛基因组,基因组数据,Westar,品系,进化分析,qRT,GUS,染色方法,不同组织,原生质体,农杆菌,侵染,转化方法,过量表达,植株,bp,分别编,结合结构,结构域,Coiled,白菜,2J,花蕾,花药发育,细胞核,转录激活活性,绒毡层,特异表达基因,启动子,转基因,因材,雄性不育,营养器官,生殖器官,创制,良好基础,组织表达分析

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