目的:探讨miR-124通过调节Jagged1(JAG1)/Notch信号通路对肾细胞癌(RCC)细胞增殖、凋亡、迁移和侵袭的影响.方法:收集2018年6月至2021年10月在武汉市第三医院治疗的38例RCC患者的RCC组织和癌旁组织标本,并体外培养RCC细胞(Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2)和人正常肾细胞(293T),采用免疫组织化学法、qPCR和WB法检测miR-124和JAG1蛋白在RCC组织和细胞中的表达水平.选择miR-124表达与293T细胞差异最大的OS-RC-2细胞进行转染,按转染物不同分为Control组、NC mimic组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组和miR-124 mimic+pc-JAG1组.采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-124与JAG1的关系;qPCR法检测miR-124、JAG1 mRNA表达;免疫组化法分析JAG1蛋白表达;WB法检测JAG1、凋亡相关蛋白(cleaved caspase-3、BAX和Bcl2)和Notch信号通路相关蛋白(NICD、HES1和HES5)的表达;MTT法检测OS-RC-2细胞增殖;Transwell检测OS-RC-2细胞迁移和侵袭;流式细胞术检测OS-RC-2细胞凋亡.结果:与癌旁组织比较,RCC组织中miR-124表达降低,JAG1 mRNA和蛋白表达均升高(均P<0.01);与293T细胞比较,Caki-2、A498、ACHN、786-O、OS-RC-2细胞中miR-124水平降低,JAG1 mRNA和蛋白表达均升高(均P<0.05);miR-124直接负调控JAG1.与Control组和NC mimic组比较,miR-124 mimic组miR-124表达水平、细胞凋亡率以及cleaved caspase-3和BAX蛋白表达均升高,JAG1 mRNA和蛋白表达均降低,细胞活力(24、48、72 h)下降,迁移、侵袭细胞数减少,Bcl2及NICD、HES1、HES5蛋白表达降低(均P<0.05);与miR-124 mimic+pcDNA组和miR-124 mimic组相比,miR-124 mimic+pc-JAG1组miR-124表达水平、细胞凋亡率以及cleaved caspase-3和BAX蛋白表达均降低,JAG1 mRNA和蛋白表达均升高,细胞活力(24、48、72 h)增加,迁移、侵袭细胞数增多,Bcl2及NICD、HES1、HES5蛋白表达均增加(均P<0.05).结论:miR-124通过下调JAG1抑制Notch信号通路,降低RCC OS-RC-2细胞的增殖、迁移和侵袭能力,促进细胞凋亡.

miR-124;Jagged1/Notch信号通路;肾细胞癌;OS-RC-2细胞;增殖;凋亡;迁移;侵袭

武汉市第三医院 泌尿外科,湖北 武汉 430074

[1]张炜;胡志;付桥;孙伟;徐律;褚浩;王潇;张志超-.miR-124通过调节Jagged1/Notch信号通路影响肾细胞癌OS-RC-2细胞的恶性生物学行为)[J].中国肿瘤生物治疗杂志,2022(08):732-740

HES5

miR,Jagged1,Notch,肾细胞癌,OS,恶性生物学行为,JAG1,RCC,武汉市,癌旁组织,组织标本,体外培养,Caki,A498,ACHN,293T,免疫组织化学法,qPCR,WB,转染,Control,NC,mimic+pcDNA,双荧光素酶报告基因实验,免疫组化法,凋亡相关蛋白,cleaved,caspase,BAX,Bcl2,NICD,HES1,MTT,Transwell,细胞迁移和侵袭,流式细胞术,平降,负调控,细胞凋亡率,细胞活力,细胞的增殖,侵袭能力

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