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犬尿氨酸-3-单加氧酶SibC的体外蛋白表达纯化与生化反应
文献摘要：
目的 通过体外基因合成西比罗霉素(sibiromycin)生物合成途径中推测但未验证功能的犬尿氨酸-3-单加氧酶编码基因sibC(GenBank:FJ768674.1:1380-2810),研究该犬尿氨酸-3-单加氧酶SibC的体外生化功能,为解析放线菌素D中相关结构单元的生物合成途径提供参考.方法 通过生物信息学分析体外全合成基因sibC的序列并克隆至表达载体,将重组质粒pET28a-sibC转化至E.coli BL21(DE3)中进行表达,利用Ni-NTA亲和层析法纯化SibC,以犬尿氨酸(kynurenine,kyn,1)为底物进行SibC的体外酶活性测试,利用高效液相色谱(HPLC)对酶反应产物进行分析.结果 PCR验证证明表达菌株E.coli BL21(DE3)/pET28a/sibC构建成功,SibC蛋白在E.coli BL21(DE3)中获得可溶性表达,经Ni-NTA亲和层析法纯化获得SibC蛋白,纯化的SibC能够催化犬尿氨酸生成3-羟基犬尿氨酸(3-hydroxykynurenine,3-HK,2).结论 体外验证了 sibiromycin中SibC的功能为犬尿氨酸-3-羟化酶,为进一步研究犬尿氨酸途径及放线菌素的生物合成奠定了基础.
文献关键词：
放线菌素D;生物合成;犬尿氨酸途径;犬尿氨酸-3-单加氧酶;色氨酸代谢
中图分类号：
作者姓名：
姚紫薇;孙长利;李青连;鞠建华
作者机构：
中国科学院南海海洋研究所中国科学院热带海洋生物资源与生态重点实验室,广东省海洋药物重点实验室,中国科学院海洋微生物研究中心,广东广州510301;中国科学院大学海洋学院,北京100049
文献出处：
引用格式：
[1]姚紫薇;孙长利;李青连;鞠建华-.犬尿氨酸-3-单加氧酶SibC的体外蛋白表达纯化与生化反应)[J].中国海洋药物,2022(01):17-23
A类：
SibC,sibiromycin,sibC,FJ768674,kyn,hydroxykynurenine
B类：
单加氧酶,表达纯化,生化反应,基因合成,比罗,生物合成途径,编码基因,GenBank,外生化,生化功能,放线菌素,结构单元,生物信息学分析,全合成,表达载体,重组质粒,pET28a,coli,BL21,DE3,NTA,亲和层析,层析法,底物,HPLC,可溶性表达,HK,羟化酶,犬尿氨酸途径,色氨酸代谢
AB值：
0.217521
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