结核病(tuberculosis,TB)是一种由结核分枝杆菌(Mycobacterium Tuberculosis,Mtb)所致的人畜共患的慢性、消耗性传染病.先天免疫细胞与Mtb的相互作用通过自噬、细胞凋亡及炎症反应等途径影响结核病的发生与发展.旨在探究减毒牛分枝杆菌卡介苗(Bacillus Calmette-Guerin,BCG)感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7后,能否发生自噬与细胞凋亡.试验以BCG不同感染复数与感染时间感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7,通过Westernblot法检测自噬及凋亡相关蛋白LC3B-Ⅱ、Beclinl、Bcl-2和Caspase3的表达水平,MTT法检测细胞存活率,透射电镜观察感染BCG的巨噬细胞形态学变化,探究BCG感染RAW264.7是否会发生自噬和凋亡,进而确定BCG感染巨噬细胞的最佳浓度与时间.通过对巨噬细胞的分子水平和形态学检测发现,BCG以感染复数为10,感染小鼠巨噬细胞系RAW264.7时间为12h时,感染组自噬有关蛋白Beclinl﹑ LC3B-II,促凋亡蛋白Caspase3的相对表达水平极显著高于对照组(P＜0.01),抑凋亡蛋白Bcl-2的相对表达水平极显著低于对照组(P＜0.01);透射电镜观察结果显示,小鼠巨噬细胞系RAW264.7内出现明显的自噬体、自噬溶酶体和细胞核固缩等现象.研究结果表明,BCG感染巨噬细胞系RAW264.7能够发生自噬与细胞凋亡,且具有一定的感染复数和感染时间依赖性,最佳感染复数为10,最佳感染时间为12 h.

结核分枝杆菌;巨噬细胞系;自噬;凋亡;卡介苗

宁夏大学农学院,宁夏银川 750021

[1]李瑞乾;宋阿北;缪西鹏;梁晓珊;许立华-.卡介苗诱导巨噬细胞系RAW264.7发生自噬与凋亡的细胞感染模型的建立)[J].畜牧与兽医,2022(12):115-121

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