[目的]通过对生防菌淡紫灰链霉菌X33(Streptomyces lavendulae X33)建立稳定高效的遗传转化体系、评估启动子permE与内源性启动子启动活性,为菌株X33活性产物的生物合成机制研究、构建高产基因工程菌奠定基础.[方法]以携带整合型质粒pIB139的大肠杆菌(Escherichia coli)ET12567(pUZ8002)为供体菌、菌株X33为受体菌进行接合转移;对影响接合转移效率的关键因素(接合转移培养基、热激温度、预萌发时间、供受体比例及抗生素覆盖时间等)进行优化;以质粒pIB139为骨架、β-葡萄糖苷酶(GUS)为报告基因构建启动子活性检测载体,分析4个内源性启动子及permE的启动活性.[结果]通过接合转移方法成功建立了菌株X33的遗传转化体系,其最佳接合转移条件为:孢子于55℃热激10 min,预萌发1 h,供、受体比例为10:1,以高氏一号为接合转移培养基,混合培养12 h后覆盖抗生素,接合转移效率可达5.8×10-5;启动子活性分析表明:链霉菌常用启动子permE的启动活性远高于4个内源性启动子P116、P4565、P5092、P5500.[结论]建立及优化了菌株X33的遗传转化体系,确定了启动子permE在菌株X33中的启动活性.

淡紫灰链霉菌X33;接合转移效率;遗传转化体系;内源性启动子

孙亚楠;王园秀;丁忠涛;张斌;吴晓玉

江西农业大学 生物科学与工程学院/江西省农业微生物资源开发与利用工程实验室,江西 南昌 330045;江西省果蔬采后处理关键技术及质量安全协同创新中心,江西 南昌 330045

江西农业大学学报

[1]孙亚楠;王园秀;丁忠涛;张斌;吴晓玉-.Streptomyces lavendulae X33遗传转化体系的建立及其内源性启动子活性的比较)[J].江西农业大学学报,2022(05):1250-1260

内源性启动子,淡紫灰链霉菌,permE,pIB139,ET12567,pUZ8002,接合转移效率,P116,P4565,P5092,P5500

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