典型文献
铁皮石斛DoAGL6基因及启动子克隆与分析
文献摘要：
AGL6基因是MADS-box转录因子家族中的一员,是植物特有的转录调控因子,参与花器官形成,对唇瓣的形成起到关键作用.获得铁皮石斛DoAGL6基因及其启动子,并进行生物信息学分析,对DoAGL6基因启动子进行瞬时表达活性验证,可为进一步研究DoAGL6基因的功能提供参考.本研究克隆DoAGL6基因及其上游的启动子序列,利用在线软件对克隆得到的目的基因序列、启动子序列进行预测,分别构建由全长启动子和5'端缺失启动子驱动GUS的重组表达载体并瞬时转化拟南芥及铁皮石斛原球茎,探究其表达活性.结果表明,成功克隆了DoAGL6基因及其启动子,DoAGL6基因编码区长729 bp,编码243个氨基酸,编码蛋白分子式为C1213H1955N359O375S12,预测亚细胞定位于细胞核中;保守结构域分析表明,DoAGL6具有保守的MADS-box和K-box两个结构域,属于MADS基因家族MIKC亚家族.启动子序列长度为1891 bp,顺式作用元件分析结果显示,DoAGL6基因启动子中除了核心启动元件TATA-box、CAAT-box外,还有许多其他顺式作用元件,如脱落酸响应元件(ABRE)、光反应顺式调节元件(G-Box)、茉莉酸甲酯响应元件(TGACG-motif)、MADS-box蛋白结合位点(GArG-Box)等.成功构建融合表达载体pCAMBIA1300-A1-promoter::GUS、pCAMBIA1300-A2-promoter::GUS、pCAMBIA1300-A3-promoter::GUS,拟南芥和铁皮石斛原球茎瞬时转化及GUS组织化学染色结果表明,随着启动子5'端缺失片段的增长,GUS活性逐渐降低,启动子活性逐渐减弱,即全长启动子A1(?1891～1)的活性最强,5'端缺失片段A2(?1488～1)次之,A3(?784～1)活性最弱.瞬时转化后的拟南芥和铁皮石斛原球茎GUS染色均呈现蓝色,但与对照相比均较浅,说明全长启动子和2个5'端缺失启动子都具有驱动GUS的活性,但启动活性都比CaMV35S启动子的启动活性弱.
文献关键词：
铁皮石斛;AGL6基因;基因克隆;启动子;GUS活性
中图分类号：
作者姓名：
孙博;王义琴;何玲;王冬梅;黄鑫;师凯辉;陈宇;臧睿;和凤美
作者机构：
云南农业大学园林园艺学院,云南昆明 650201
文献出处：
引用格式：
[1]孙博;王义琴;何玲;王冬梅;黄鑫;师凯辉;陈宇;臧睿;和凤美-.铁皮石斛DoAGL6基因及启动子克隆与分析)[J].热带作物学报,2022(09):1771-1778
A类：
DoAGL6,C1213H1955N359O375S12,GArG
B类：
铁皮石斛,启动子克隆,MADS,box,一员,转录调控因子,花器官,唇瓣,生物信息学分析,基因启动子,瞬时表达,表达活性,活性验证,启动子序列,目的基因,基因序列,全长,GUS,重组表达,表达载体,瞬时转化,拟南芥,原球茎,基因编码,编码区,区长,bp,编码蛋白,分子式,亚细胞定位,细胞核,保守结构域,基因家族,MIKC,亚家族,顺式作用元件,TATA,CAAT,脱落酸,响应元,ABRE,光反应,Box,茉莉酸甲酯,TGACG,motif,蛋白结合,结合位点,融合表达,pCAMBIA1300,promoter,A2,A3,组织化学染色,染色结果,启动子活性,最弱,蓝色,较浅,启动活性,CaMV35S,基因克隆
AB值：
0.290411
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