目的 通过体外实验探讨低氧诱导因子1α(HIF1α)和HIF2α经表皮生长因子(EGF)调控胶质瘤细胞化疗抵抗的机制.方法 采用CRISPR-CAS9系统单独或同时敲除U87细胞HIF1α和HIF2α表达(分为HIF1α单独敲除组、HIF2α单独敲除组、HIF1α/HIF2α同时敲出组),另设未转染的U87细胞为对照组.缺氧或常氧培养各组细胞并给予替莫唑胺(TMZ)处理,检测各组细胞毒性率和凋亡率.缺氧培养HIF1α/HIF2α同时敲出组的U87细胞,RT-qPCR检测EGF mRNA表达水平,进一步在培养基中添加EGF后予以TMZ处理,检测细胞毒性率和凋亡率.结果 Western blot提示U87细胞HIF1α和HIF2α敲除成功.缺氧条件下,HIF1α和HIF2α单独敲除组及HIF1α/HIF2α同时敲除组EGF表达水平较对照组显著降低(P<0.05),HIF1α/HIF2α同时敲除组EGF表达水平也低于HIF1α、HIF2α单独敲除组(P<0.05).缺氧条件下,TMZ处理的HIF1α、HIF2α单独敲除组的细胞毒性率与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),HIF1α/HIF2α同时敲除组细胞毒性率高于对照组及HIF1α、HIF2α单独敲除组(P<0.05);TMZ处理的HIF1α、HIF2α单独敲除组及HIF1α/HIF2α同时敲除组细胞凋亡率均高于对照组(P<0.05),HIF1α/HIF2α同时敲除组细胞凋亡率高于HIF1α、HIF2α单独敲除组.缺氧条件下,HIF1α/HIF2α同时敲除组添加EGF后,TMZ处理的细胞毒性率和细胞凋亡率均低于未添加EGF的HIF1α/HIF2α同时敲除组(P<0.05).结论 HIF1α和HIF2α经EGF促进胶质瘤细胞化疗抵抗.

胶质瘤;低氧诱导因子1α;低氧诱导因子2α;表皮生长因子;缺氧;化疗抵抗

杜军;汪攀;龚胜;赵璐;郭海燕;廖彬

重庆市人民医院神经外科 401147;重庆市黔江中心医院神经外科 409000

重庆医学

[1]杜军;汪攀;龚胜;赵璐;郭海燕;廖彬-.HIF1α/HIF2α经EGF调控胶质瘤细胞化疗抵抗机制研究)[J].重庆医学,2022(08):1261-1265

HIF1,HIF2,EGF,胶质瘤细胞,化疗抵抗,抵抗机制,体外实验,低氧诱导因子,表皮生长因子,CRISPR,CAS9,敲除,U87,敲出,转染,常氧,替莫唑胺,TMZ,细胞毒性,qPCR,blot,缺氧条件,细胞凋亡率

0.131901