目的:探究单羧酸转运蛋白2(monocarboxylate transporters 2,MCT2)对缺氧/复氧(hypoxi-a/reoxygenation,H/R)后视网膜神经节细胞凋亡与焦亡的影响及机制.方法:将视网膜神经节细胞RGC-5随机分为对照组、H/R组、MCT2组、MCT2+ML385组,通过脂质体将pcDNA3.1-MCT2重组质粒转染至RGC-5细胞,建立细胞H/R模型,并用Nrf2抑制剂ML385处理细胞;细胞进行对应处理后,实时荧光定量PCR和蛋白质印迹(Western blot)法检测转染效率,CCK-8法测定细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡水平,Hoechst/PI染色法检测PI凋亡指数,Western blot法检测细胞内凋亡相关蛋白与焦亡相关蛋白的表达水平,免疫荧光染色观察细胞内核因子E2相关因子(Nrf2)与半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶1(Caspase-1)表达.结果:将pcDNA3.1-MCT2转染至RGC-5细胞后,细胞内MCT2 mRNA与蛋白相对表达量均显著上调(P<0.05);经H/R处理后,细胞增殖活性下降,细胞凋亡率增加,PI凋亡指数升高,细胞内Bax和Caspase-3蛋白相对表达量均上调而Bcl-2蛋白相对表达量下调,GSDMD、Caspase-1、NLRP3及IL-1β蛋白相对表达量均上调,Nrf2荧光强度减弱,Caspase-1荧光强度增强,差异均有统计学意义(P<0.05);细胞转染pcDNA3.1-MCT2再经H/R处理后,细胞增殖活性升高,细胞凋亡率减少,PI凋亡指数降低,细胞内Bax和Caspase-3蛋白相对表达量均下调,Bcl-2蛋白相对表达量上调,同时,细胞内GSDMD、Caspase-1、NLRP3及IL-1β蛋白相对表达量均下调,Nrf2荧光强度增强,Caspase-1荧光强度则减弱,差异均有统计学意义(P<0.05);而细胞经转染pcDNA3.1-MCT2与H/R处理后再用Nrf2抑制剂ML385作用,细胞增殖活性下降,细胞凋亡率与PI凋亡指数升高,细胞内Bax和Caspase-3蛋白相对表达量均上调、Bcl-2蛋白相对表达量下调,GSDMD、Caspase-1、NLRP3及IL-1β 蛋白相对表达量均上调,Nrf2荧光强度减弱,Caspase-1荧光强度增强,差异均有统计学意义(P<0.05).结论:MCT2能够抑制H/R诱导的视网膜神经节细胞的凋亡与焦亡,该作用机制可能与激活Nrf2途径相关.

单羧酸转运蛋白2;视网膜神经节细胞;细胞凋亡;细胞焦亡;核因子E2相关因子

张小敏;刘文;蔡傲竹

武汉大学中南医院眼科,湖北 武汉 430070

河北医学

[1]张小敏;刘文;蔡傲竹-.MCT2激活Nrf2通路调控H/R视网膜神经节细胞凋亡与焦亡)[J].河北医学,2022(09):1425-1431

hypoxi,MCT2+ML385

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