目的 探讨DNA聚合酶δ催化亚基基因(POLD1)在增强三阴性乳腺癌MDA-MB-231细胞耐受紫杉醇(PTX)抑制其活性及上皮间质转化的作用.方法 细胞计数试剂盒8(CCK8)法检测PTX抑制MDA-MB-231细胞活性.使用重组慢病毒转染构建POLD1过表达的MDA-MB-231/POLD1-OE及空载对照的MDA-MB-231/POLD-NC细胞株.分设3个组,分别为无处理的MDA-MB-231/POLD-NC细胞(POLD1-NC组)、分别使用PTX刺激的MDA-MB-231/POLD-NC(PTX+POLD1-NC组)及MDA-MB-231/POLD1-OE(PTX+POLD1-OE组)细胞.1μmol/L PTX刺激作用48 h后,通过蛋白质印迹实验检测各组细胞P125(POLD1编码的蛋白)、增殖细胞核抗原(PCNA)、B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)、E-钙黏蛋白(E-cadherin)及波形蛋白(Vimentin)表达水平;CCK8、Transwell侵袭实验和划痕实验分别检测各组细胞的活性及侵袭迁移能力.结果 CCK8结果显示,不同浓度(0.1、0.5、1、5、10、50μmol/L)的PTX刺激48 h后,细胞的存活率分别为(87.71±2.13)％、(74.13±1.58)％、(56.94±1.21)％、(34.23±0.15)％、(10.55±0.02)％和(1.71±0.09)％,较对照组(0μmol/L)下降,各组数据间总的差异有统计学意义,F=2051.408,P<0.001.蛋白质印迹实验结果显示,1μmol/L PTX刺激48 h后,与POLD1-NC组相比,PTX+POLD1-NC组细胞的P125、PCNA和Vimentin的表达降低(P值分别为<0.001、0.007和0.034),而E-cadherin的表达上升,P=0.026;与POLD1-NC组相比,PTX+POLD1-OE组细胞中PCNA、Bcl-2和Vimentin蛋白表达水平有所降低,但略高于PTX+POLD1-NC组,E-cadherin的表达则略高于POLD1-NC组细胞而略低于PTX+POLD1-NC组,但差异均无统计学意义.CCK8实验结果显示,以POLD1-NC组细胞存活率(100.00±8.83)％为对照,PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组存活率分别为(48.87±2.41)％和(80.78±5.47)％,总体差异有统计学意义,F=52.749,P<0.001.其中PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组存活率较POLD1-NC组降低(P值分别为<0.001和0.009),而PTX+POLD1-OE组细胞的存活率高于PTX+POLD1-NC组,P=0.001.Transwell侵袭实验结果显示,POLD1-NC组、PTX+POLD1-NC组及PTX+POLD1-OE组的穿膜细胞数分别为(238.33±12.01)、(122.33±9.07)和(192.67±3.21)个,总体差异有统计学意义,F=129.672,P<0.001.其中PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组穿膜细胞数少于POLD1-NC组(P值分别为<0.001和0.001),但PTX+POLD1-OE组的穿膜细胞数多于PTX+POLD1-NC组,P<0.001.划痕实验显示,POLD1-NC组、PTX+POLD1-NC组及PTX+POLD1-OE组细胞的24 h愈合率分别为(30.93±3.05)％、(16.19±2.18)％和(23.47±2.27)％,总体差异有统计学意义,F=25.490,P=0.001.其中PTX+POLD1-NC组和PTX+POLD1-OE组愈合率低于POLD1-NC组(P值分别为<0.001和0.011),而PTX+POLD1-OE组的愈合率高于PTX+POLD1-NC组,P=0.012.结论 PTX能够下调MDA-MB-231细胞中POLD1的表达,POLD1的高表达能够增强MDA-MB-231细胞对PTX的耐药性.

三阴性乳腺癌;DNA聚合酶δ催化亚基基因;紫杉醇;细胞活性;上皮间质转化

梁至洁;周晓;黄东琳;王梦欣;万言;韦长元

广西医科大学第五附属医院医学实验中心,广西 南宁 530022;广西医科大学肿瘤医院乳腺外科,广西 南宁 530022

中华肿瘤防治杂志

[1]梁至洁;周晓;黄东琳;王梦欣;万言;韦长元-.POLD1增强三阴性乳腺癌细胞MDA-MB-231对紫杉醇耐药性的作用研究)[J].中华肿瘤防治杂志,2022(19):1383-1390

POLD,PTX+POLD1

三阴性乳腺癌细胞,MB,紫杉醇耐药,耐药性,催化亚基,上皮间质转化,试剂盒,CCK8,细胞活性,重组慢病毒,慢病毒转染,过表达,OE,空载,NC,细胞株,分设,无处,刺激作用,蛋白质印迹,实验检测,P125,增殖细胞核抗原,PCNA,Bcl,钙黏蛋白,cadherin,波形蛋白,Vimentin,Transwell,划痕实验,侵袭迁移,迁移能力,蛋白表达水平,略高于,略低于,细胞存活率,膜细胞,愈合率

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