目的 探讨内向整流钾(Kir)2.1通道蛋白对人牙囊细胞(hDFC)成骨分化的影响及其机制.方法 组织块结合酶消化法分离、培养hDFC,流式细胞术鉴定细胞来源,成骨诱导鉴定hDFC成骨分化能力;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测Kir2.1编码基因KCNJ2在hDFC中的表达,定量逆转录聚合酶链反应(RT-qPCR)检测Kir2.1在hDFC成骨诱导前和诱导后KCNJ2基因表达量的变化;膜片钳技术检测hDFC在成骨诱导前和诱导后的细胞膜电位变化;提高细胞外钾离子的浓度(50 mmol·L-1)观察膜电位去极化对hDFC成骨分化能力的影响,应用Kir2.1钾通道阻断剂氯化铯(CsCl)和4-甲氧基苄基-1-萘基甲基-胺盐(ML133)观察阻断Kir2.1通道对hDFC成骨分化能力的影响,同时行RT-qPCR检测观察2种干预措施前后成骨分化相关基因[RUNX相关转录因子2(RUNX2)、骨钙素(OCN)]的表达变化情况.降低细胞外钾离子的浓度(2 mmol·L-1),钙离子成像检测膜电位超极化对细胞内钙离子浓度的变化.结果 RT-PCR结果显示,hDFC表达Kir2.1通道基因KCNJ2;RT-qP-CR结果显示,成骨诱导7 d后,KCNJ2在hDFC中的表达量上调;膜片钳结果显示,成骨诱导7 d后,hDFC膜电位由(-12±3.2)mV超极化为(-47±5.2)mV;茜素红和碱性磷酸酶染色结果显示,提高细胞外钾离子的浓度或阻断Kir2.1通道蛋白的功能,能够明显抑制hDFC的成骨矿化能力;钙离子成像结果显示,膜电位超极化能够引起细胞内钙离子浓度的增高.结论 Kir2.1通道蛋白介导的膜电位超极化在hD-FC成骨分化的过程中起重要的作用.

人牙囊细胞;内向整流钾2.1通道蛋白;成骨分化;膜电位超极化

张鹏;左东川;牟思宇;钟宇彤;袁小平;曾锦

西南医科大学附属口腔医院正畸科,泸州646000;西南医科大学口颌面修复重建和再生实验室,泸州646000;西南医科大学电生理学教育部重点实验室,心血管医学研究所,泸州646000

华西口腔医学杂志

[1]张鹏;左东川;牟思宇;钟宇彤;袁小平;曾锦-.内向整流钾2.1通道蛋白对人牙囊细胞成骨分化的影响及其机制研究)[J].华西口腔医学杂志,2022(02):139-147

人牙囊细胞,Kir,hDFC,组织块结合酶消化法,ML133,膜电位超极化,hD

内向,整流,成骨分化,流式细胞术,成骨诱导,诱导鉴定,分化能力,逆转录聚合酶链反应,Kir2,编码基因,KCNJ2,qPCR,基因表达量,膜片钳技术,细胞膜电位,钾离子,去极化,钾通道,阻断剂,氯化铯,CsCl,甲氧基,苄基,萘基,胺盐,时行,RUNX2,骨钙素,OCN,表达变化,成像检测,细胞内钙,钙离子浓度,mV,茜素红,碱性磷酸酶,染色结果,骨矿化,白介

0.169683