目的 探讨咖啡酸苯乙酯(CAPE)对大鼠肝星状细胞(HSC)-T6 的作用及作用机制.方法 不同浓度CAPE(5、10、15 μmol/L)分别作用于HSC-T6细胞,同时构建GFP-LC3质粒转染至HSC-T6 细胞,自噬诱导剂雷帕霉素和自噬抑制剂3 -Methyladenine(3-MA)进行干预,采用MTT方法检测CAPE对HSC-T6细胞增殖的影响,透射电镜观察CAPE对HSC-T6细胞超微结构的影响,细胞免疫荧光实验检测CAPE对HSC-T6 细胞LC3 表达的影响,qRT-PCR检测自噬相关基因ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1和LC3 mRNA的表达情况,Western-Blot检测 ATG7、Beclin1、LC3I/Ⅱ、p-AKT/AKT、p-mTOR蛋白的表达情况.计量资料组间比较采用单因素方差分析及Dunnett-t检验.结果 CAPE干预组较对照组可抑制HSC-T6 细胞增殖,且生长明显受到抑制,细胞质中可观察到脂滴和轮盘状自噬体散在分布.与对照组(13.34%±2.59%)相比,不同浓度 CAPE 5 μmol/L(23.68%±3.76%,t = -5.553,P＜0.001)、10 μmol/L(43.47%±3.83%,t = -15.958,P＜0.001)、15 μmol/L(57.25%±2.78%,t= -28.334,P＜0.001)的LC3 荧光染色均显著增强,且呈正相关.CAPE干预组(10、15 μmol/L)ATG5、ATG7、ATG12、Beclin1和LC3 mRNA 水平明显增加(P 值均＜0.05).GFP-LC3 质粒转染至 HSC -T6 细胞后,CAPE干预组(79.01%±6.69%)较对照组(67.06%±6.74%)LC3荧光染色明显增强(t= -3.083,P=0.012);同时给予自噬诱导剂雷帕霉素(86.88%±5.42%),LC3表达较CAPE组明显增强(t= -2.239,P=0.049);而给予自噬抑制剂3-MA(71.22%±4.29%),其表达则明显减低(t= -2.404,P=0.037);CAPE干预组和诱导剂雷帕霉素组ATG7、Beclin1和LC3 I/Ⅱ的蛋白表达水平增加,AKT/p-AKT、p-mTOR蛋白的表达水平降低;而抑制剂3-MA组则得出相反的结果.结论 CAPE可能通过抑制AKT/mTOR信号通路诱导自噬形成,进而抑制HSC-T6细胞增殖.

肝硬化;咖啡酸类;肝星状细胞

杨宁;邓江;王怡恺;常莎;高宁;王文俊;党双锁;石娟娟

陕西中医药大学附属医院肿瘤医院,陕西咸阳712000;西安交通大学第二附属医院感染科,西安710004

临床肝胆病杂志

[1]杨宁;邓江;王怡恺;常莎;高宁;王文俊;党双锁;石娟娟-.咖啡酸苯乙酯对肝星状细胞的作用及机制分析)[J].临床肝胆病杂志,2022(10):2273-2278

Methyladenine,咖啡酸类

咖啡酸苯乙酯,机制分析,CAPE,大鼠肝星状细胞,HSC,T6,GFP,质粒转染,自噬诱导剂,雷帕霉素,自噬抑制剂,MA,MTT,透射电镜,电镜观察,细胞超微结构,细胞免疫,免疫荧光,实验检测,qRT,自噬相关基因,ATG5,ATG7,ATG12,Beclin1,Blot,LC3I,AKT,mTOR,单因素方差分析,Dunnett,可抑制,长明,细胞质,脂滴,轮盘,自噬体,荧光染色,明显增强,减低,蛋白表达水平,平降,肝硬化

0.232764