暗色刺参(Isostichopusfuscus)已被列入《濒危野生动植物种国际贸易公约》(CITES)目录.为精确辨别和有效保护该物种,作者进行了精准鉴定暗色刺参的实时荧光PCR方法的研究.在GenBank中收集暗色刺参及近似种海参的线粒体序列,使用海参的线粒体基因中细胞色素C氧化酶亚基Ⅰ(Cytochrome oxidase subunitⅠgene,COⅠ)进行实时荧光PCR中引物和探针的设计.根据收集到的17种海参的25条COⅠ序列,设计了2组具有暗色刺参特异性的引物探针组合I-fu-1和I-fu-2;同时根据暗色刺参实物测序得到的COⅠ序列,设计了引物探针I-fu-3～I-fu-6.实时荧光PCR检测结果显示:I-fu-1、I-fu-3、I-fu-4、I-fu-6仅在目标物种中检测到阳性,I-fu-2和I-fu-5则在墨西哥刺参(Isostichopus badionotus)中也检测到阳性;对纯暗色刺参样本的灵敏度(指在一次荧光PCR反应中能够检测到暗色刺参的最低浓度)检测显示,I-fu-4优于I-fu-1、I-fu-3和I-fu-6,可达到0.0008 ng/μL,因此认为I-fu-4是最佳的引物探针组合.利用I-fu-4对混合物中暗色刺参进行检测,在同属近似种墨西哥刺参含量高达99.9％,暗色刺参含量低至0.05％的混合样品中,暗色刺参的实时荧光PCR检测也显示了强阳性结果.本研究建立的鉴定方法具有高特异性和灵敏度的特性,有助于快速、精准地鉴定暗色刺参.

暗色刺参;物种鉴定;实时荧光PCR;濒危物种

吴姗;虞惠贞;沈旭芳;孙超;张荃;陈哲;尹文秀;张明哲;张晓峰

杭州海关技术中心,浙江 杭州310016

中国海洋大学学报（自然科学版）

[1]吴姗;虞惠贞;沈旭芳;孙超;张荃;陈哲;尹文秀;张明哲;张晓峰-.暗色刺参的实时荧光PCR鉴定)[J].中国海洋大学学报（自然科学版）,2022(12):33-43

暗色刺参,Isostichopusfuscus,Isostichopus,badionotus

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