目的:探讨Kindlin-2对小鼠子宫发育及雌鼠生育能力的影响及其作用机制.方法:利用Cdh16-Cre工具鼠和Kindlin-2flox/flox小鼠构建在子宫内膜中特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,观察敲除Kindlin-2对雌鼠子宫内膜发育和生殖力的影响.在子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中分别进行高表达和敲低Kindlin-2的实验,检测雷帕霉素靶蛋白(mammalian target of rapamycin,mTOR)信号通路的激活变化,并且提取特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(实验组,基因型为Cdh16-Cre;Kindlin-2flox/flox)和未特异性敲除Kindlin-2的雌鼠(对照组,基因型为Kindlin-2flox/flox)子宫蛋白,每组包含6～8只小鼠,重复3次独立实验,检测mTOR信号通路和Hippo信号通路关键分子的蛋白水平.结果:成功构建了子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的小鼠模型,通过鼠尾聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)、Western blot、免疫组织化学染色(immunohistochemistry,IHC)等方法鉴定和验证Kindlin-2在小鼠子宫中的敲除效率.子宫内膜特异性敲除Kindlin-2的雌鼠与对照组相比体质量减轻、生殖能力严重受损、出生仔鼠数量减少,但出生仔鼠中雌鼠和雄鼠的比例未发生改变,通过苏木精-伊红染色实验观察表明实验组子宫内膜发育不完整、子宫壁厚度变薄.机制方面,子宫内膜癌细胞系HEC-1和Ish中敲除Kindlin-2能够下调mTOR、磷酸化mTOR、腺嘌呤核糖核苷酸激活蛋白激酶(adenosine monophosphate-activated protein kinase,AMPK)、磷酸化的AMPK和磷酸化的核糖体蛋白(ribosomal protein S6,S6)的蛋白水平,在雌鼠子宫中发现特异性敲除Kindlin-2能够上调Mps结合1(Mps one binding 1,MOB1)、磷酸化的 Yes 相关蛋白(Yes-associated protein,YAP)的蛋白水平.结论:Kindlin-2 通过抑制mTOR信号通路、激活Hippo信号通路抑制子宫内膜的发育,进而抑制雌鼠的生育能力.

Kindlin-2;小鼠;特异性敲除;子宫内膜;mTOR信号通路;Hippo信号通路

张京;宋佳桂;王振斌;龚玉清;王天卓;周津羽;战军;张宏权

北京大学基础医学院人体解剖与组织胚胎学系,北京 100191;北京大学第三医院医学创新研究院基础医学研究中心,北京 100191

北京大学学报（医学版）

[1]张京;宋佳桂;王振斌;龚玉清;王天卓;周津羽;战军;张宏权-.Kindlin-2通过mTOR和Hippo信号通路调节小鼠子宫内膜发育)[J].北京大学学报（医学版）,2022(05):846-852

Cdh16,2flox

Kindlin,mTOR,Hippo,小鼠子宫内膜,雌鼠,生育能力,Cre,建在,特异性敲除,小鼠模型,生殖力,子宫内膜癌细胞,细胞系,HEC,Ish,敲低,雷帕霉素靶蛋白,mammalian,target,rapamycin,基因型,关键分,鼠尾,聚合酶链式反应,polymerase,chain,reaction,blot,免疫组织化学染色,immunohistochemistry,IHC,宫中,除效率,体质量减轻,生殖能力,生仔,仔鼠,雄鼠,苏木,木精,伊红,染色实验,实验观察,宫壁,壁厚,变薄,磷酸化,腺嘌呤,激活蛋白,蛋白激酶,adenosine,monophosphate,activated,protein,kinase,AMPK,核糖体蛋白,ribosomal,S6,Mps,one,binding,MOB1,Yes,associated,YAP

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