目的:探究miR-216a-5p对胃癌细胞自噬和放射敏感性的调控机制及其对双特异性磷酸酶10(DUSP10)的调控作用.方法:采用直线加速器6-MVX射线照射SGC-7901细胞,剂量率为0.8Gy/min,总剂量为8Gy.用Lipofectamine 2000试剂将miR-216a-5p mimic、NC mimic、pcDNA DUSP10或pcDNA NC转染到 SGC-7901 细胞中.转染后,将细胞分为 miR-216a-5p mimic组和NC mimic组,每组又分为0Gy和8Gy两个亚组.在拯救实验中,将细胞分为miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组和miR-216a-5p mimic+pcDNA NC 组.通过 qRT-PCR 检测 miR-216a-5p 和 DUSP10 mRNA 水平.通过 5-乙炔基-2'-脱氧尿苷(E-dU)掺入实验和集落形成测定检测细胞增殖.通过流式细胞仪评估细胞凋亡.通过Western blot检测DUSP10、Bax、Bad、Bcl-2、LC3和p62的蛋白表达.通过免疫荧光法检测γH2AX的表达,用于评估细胞中的DNA双链断裂(DSB).通过荧光素酶报告基因检测miR-216a-5p和DUSP10的靶向关系.通过GFP-mRFP-LC3检测 自噬体.结果:与8Gy NC-mimic组相比,8Gy miR-216a-5p-mimic组的集落数量、EdU阳性率和Bcl-2蛋白表达水平降低,而γH2AX阳性率、细胞凋亡率和Bax和Bad蛋白表达水平升高(P＜0.01).与8Gy NC-mimic组相比,8GymiR-216a-5p-mimic组的自噬体数量和LC311蛋白表达水平降低,而p62蛋白表达水平升高(P＜0.001).与miR-216a-5p-mimic共培养后,与DUSP10-3'-UTR-MUT组相比,DUSP10-3'-UTR-WT的相对荧光素酶活性显著降低(P＜0.001).与NC-mimic组相比,miR-216a-5p-mimic组的DUSP10 mRNA和蛋白表达水平均降低(P＜0.001).与miR-216a-5p mimic+pcDNA NC组相比,miR-216a-5p mimic+pcDNA DUSP10组的集落数量和自噬体数量升高,而细胞凋亡率降低(P＜0.001).结论:miR-216a-5p通过抑制DUSP10来抑制细胞增殖、增加放射诱导的细胞凋亡并抑制放射诱导的自噬,从而增强胃癌细胞的放射敏感性.

胃癌;miR-216a-5p;双特异性磷酸酶10;自噬;放射敏感性

陕西省肿瘤医院 陕西西安710061;西安交通大学第一附属医院肿瘤外科 陕西西安710061

[1]尹建浩;陈威;王琼;袁达伟;朱琨;李康;线胤生;张勇;许刚-.上调miR-216a-5p通过靶向双特异性磷酸酶10抑制胃癌细胞自噬并增强放射敏感性)[J].现代生物医学进展,2022(22):4206-4214,4257

DUSP10,8GymiR,LC311

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