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基于镜像酶正交酶切的蛋白质复合物规模化精准分析新方法
文献摘要：
蛋白质主要以复合物的形式参与各项生命活动.化学交联质谱(CXMS)技术作为近年来新兴的蛋白质复合物解析技术,不仅可实现蛋白质复合物规模化解析,而且普遍适用于任意相对分子质量和纯度的蛋白质复合物样品,因此已成为X-射线晶体衍射技术、冷冻电镜技术等蛋白质复合物解析经典技术的重要补充.目前,CXMS主要采用胰蛋白酶将交联后的蛋白质复合物进行酶切,并进行质谱鉴定.然而鉴定到的交联肽段谱图中b/y特征碎片离子的鉴定数目不足,且因肽段序列匹配连续性较差导致谱图可信度相对较低,影响了蛋白质复合物交联位点的鉴定精准度.该文基于镜像酶正交切割的互补特性,采用胰蛋白酶镜像酶与胰蛋白酶联合酶切的方法,对交联后的蛋白质复合物分别进行酶切,再利用液相色谱-质谱联用技术对酶解产生的交联肽段进行鉴定,进而实现蛋白质复合物的组成、相互作用和结构位点距离约束的解析.对牛血清白蛋白和大肠杆菌全蛋白的交联肽段的分析结果表明,该方法通过增加交联肽段谱图中特征碎裂离子的数目和连续性,鉴定到的大肠杆菌全蛋白的交联位点,较单一胰蛋白酶酶切,提高了16％.因此,镜像酶正交酶切策略能有效提高交联肽段的鉴定准确度和覆盖度,有望为实现规模化的蛋白质复合物精准解析提供新思路.
文献关键词：
化学交联质谱;多酶酶切;蛋白质复合物;镜像酶
中图分类号：
作者姓名：
韩若楠;赵丽丽;安雨馨;梁振;赵群;张丽华;张玉奎
作者机构：
大连理工大学,张大煜学院,辽宁大连 116024;中国科学院大连化学物理研究所,中国科学院分离分析化学重点实验室,辽宁大连 116023;中国科学院大学,北京 100049
文献出处：
引用格式：
[1]韩若楠;赵丽丽;安雨馨;梁振;赵群;张丽华;张玉奎-.基于镜像酶正交酶切的蛋白质复合物规模化精准分析新方法)[J].色谱,2022(03):224-233
A类：
镜像酶,CXMS,多酶酶切
B类：
蛋白质复合物,精准分析,生命活动,化学交联质谱,相对分子质量,晶体衍射,冷冻电镜,电镜技术,胰蛋白酶,质谱鉴定,谱图,特征碎片,碎片离子,段序列,序列匹配,可信度,互补特性,联用技术,酶解,距离约束,牛血清白蛋白,大肠杆菌,全蛋,碎裂,定准,覆盖度,精准解析
AB值：
0.214178
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