典型文献
基于微滴式数字PCR方法的鱼类环境DNA样本处理与保存技术优化
文献摘要：
以实验室内的鲫(Carassius auratus)为研究对象,利用微滴式数字PCR(Droplet Digital PCR,ddPCR)定量技术,优化了鱼类环境DNA(Environmental DNA,eDNA)样本的捕获、提取和保存方法,并对免DNA提取的PCR直扩技术进行了探索.研究结果如下:(1)在同一孔径、不同材质的6种滤膜中,捕获总量最高的是混合纤维素膜,最低的是聚碳酸酯膜,前者获得的ddPCR产物浓度可达后者的17倍;(2)提取DNA总量最高的是Qiagen DNeasy PowerWater kit,最低的是高盐法,前者获得的ddPCR产物浓度是后者的5.5倍;(3)不同滤膜和提取方法对最终的ddPCR产物总量有显著的交互作用(P<0.001);混合纤维素膜过滤和Qiagen DNeasy PowerWater kit提取的组合效果显著优于其他组合;(4)滤膜在–20℃冷冻保存和利用Longmire's buffer保存液保存的效果最好;(5)免DNA提取PCR直扩实验结果表明,高保真酶可以直接对水样进行扩增.研究对eDNA操作流程中的关键步骤进行了详细比较,确定了鱼类eDNA样本处理与保存的最优方案,为建立eDNA标准化实验流程提供了参考依据.
文献关键词：
环境DNA;滤膜;提取方法;保存条件
中图分类号：
作者姓名：
王月;刘焕章;李莎;俞丹
作者机构：
大连海洋大学, 大连 116023;中国科学院水生生物研究所水生生物多样性与保护重点实验室, 武汉 430072;中国长江三峡集团有限公司中华鲟研究所, 宜昌 443100;三峡工程鱼类资源保护湖北省重点实验室, 宜昌 443100
文献出处：
引用格式：
[1]王月;刘焕章;李莎;俞丹-.基于微滴式数字PCR方法的鱼类环境DNA样本处理与保存技术优化)[J].水生生物学报,2022(03):332-341
A类：
PowerWater,Longmire
B类：
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AB值：
0.40355
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