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原代肝细胞外泌体对肝星状细胞活化的影响
文献摘要：
目的 探讨原代肝细胞外泌体对肝星状细胞(HSC)活化的影响.方法 在原位两步胶原酶灌流法的基础上,分别分离培养小鼠原代肝细胞及HSC,采用肝细胞糖原染色法和细胞角蛋白18(CK-18)细胞化学染色法鉴定原代肝细胞,采用α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)细胞免疫荧光染色法鉴定原代HSC;采用exoEasy Maxi Kit试剂盒提取肝细胞外泌体,用电镜法、纳米颗粒跟踪分析(NTA)及蛋白免疫印迹法(Western blot)鉴定肝细胞外泌体;将肝细胞外泌体与活化HSC共培养24 h,采用逆转录-实时定量PCR(qRT-PCR)法检测HSC中α-SMA及Ⅰ型胶原(COL1A1)mRNA表达.结果 原位两步胶原酶灌流法成功分离培养获得小鼠原代肝细胞及HSC,肝细胞糖原染色法及CK-18细胞化学染色法证实原代肝细胞纯度>95％,免疫荧光染色显示HSC的α-SMA阳性率>90％;exoEasy Maxi Kit试剂盒提取的肝细胞外泌体在电镜下呈圆形或椭圆形,NTA结果显示其直径约140 nm,Western blot实验可见外泌体标志物分化抗原9(CD9)和肿瘤易感基因101(TSG101)表达;与空白对照组比较,HSCs与肝细胞外泌体共培养后HSCs的α-SMA及COL1A1 mRNA表达水平降低(P<0.05).结论 成功提取原代肝细胞外泌体,该外泌体可抑制HSC活化.
文献关键词：
原代肝细胞;肝星状细胞;肝细胞外泌体;α-平滑肌肌动蛋白;Ⅰ型胶原
中图分类号：
作者姓名：
周霞;黄佳;瞿祥;李亚骐;朱加应;姜海行
作者机构：
贵州省人民医院 急诊内科,贵州 贵阳 550000;广西医科大学第一附属医院 消化内科,广西 南宁 530000
文献出处：
引用格式：
[1]周霞;黄佳;瞿祥;李亚骐;朱加应;姜海行-.原代肝细胞外泌体对肝星状细胞活化的影响)[J].贵州医科大学学报,2022(11):1281-1287
A类：
肝细胞外泌体,exoEasy
B类：
肝星状细胞,细胞活化,两步,胶原酶,灌流法,分离培养,小鼠原代肝细胞,糖原,细胞角蛋白,平滑肌肌动蛋白,SMA,细胞免疫,免疫荧光染色法,Maxi,Kit,试剂盒,纳米颗粒,跟踪分析,NTA,蛋白免疫印迹法,blot,共培养,逆转录,实时定量,qRT,COL1A1,功分,呈圆形,椭圆形,直径约,见外,分化抗原,CD9,易感基因,TSG101,空白对照,HSCs,平降,可抑制
AB值：
0.182572
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