目的 探讨miRNA-544-3p对乙型肝炎病毒X蛋白(HBx)诱导的肝细胞癌的影响及分子机制.方法 培养含增强型绿色荧光蛋白(EGFP)和HBx的慢病毒稳转小鼠永生化肝前体细胞株14-19(HBx-EGFP-14-19细胞),并通过向昆明小鼠肝门静脉注射上述细胞构建可长期稳定表达HBx的模型,采用qPCR检测miRNA-544-3p在HBx-EGFP-14-19细胞及小鼠模型肝组织中的表达.在HBx-EGFP-14-19细胞中瞬时转染miRNA-544-3p模拟物(mimic)或抑制剂(inhibitor),应用划痕愈合实验、Transwell细胞迁移和侵袭实验检测miRNA-544-3p对HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭的影响,采用qPCR和蛋白质印迹法探究miRNA-544-3p对二磷酸腺苷核糖基化因子6(Arf6)、Akt、哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)表达的调控作用.结果 成功构建了可长期稳定表达HBx的小鼠模型,该小鼠在造模后360 d处死时可见肝组织有恶性肿瘤生成.与对照组相比,HBx-EGFP-14-19细胞和HBx模型小鼠各时间点(造模后30、90、180、360 d)肝组织中miRNA-544-3p表达水平均降低(P均<0.05).与对照组比较,转染miRNA-544-3p mimic的HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭能力均降低,转染miRNA-544-3p inhibitor的HBx-EGFP-14-19细胞迁移和侵袭能力均增强(P均<0.05).qPCR和蛋白质印迹法检测结果显示miRNA-544-3p低表达与Arf6表达水平上调、Akt-mTOR信号轴的激活有关.结论 HBx可能通过下调miRNA-544-3p激活Arf6/Akt-mTOR信号轴促进小鼠肝癌细胞的侵袭和迁移能力.

乙型肝炎病毒X蛋白;肝细胞癌;微RNA-544-3p;二磷酸腺苷核糖基化因子6;蛋白激酶B;哺乳动物雷帕霉素靶蛋白

况钦;吴勇;杜彬;毋楠;周梦瑶;杨鑫玥;卢杨;冯涛

重庆医科大学药学院、重庆市生化与分子药理学重点实验室,重庆 400016

海军军医大学学报

[1]况钦;吴勇;杜彬;毋楠;周梦瑶;杨鑫玥;卢杨;冯涛-.乙型肝炎病毒X蛋白下调微RNA-544-3p并激活Arf6/Akt-mTOR信号轴促进肝脏细胞迁移和侵袭)[J].海军军医大学学报,2022(06):604-613

Arf6,肝前体细胞

乙型肝炎病毒,3p,Akt,mTOR,肝脏细胞,细胞迁移和侵袭,miRNA,HBx,肝细胞癌,增强型绿色荧光蛋白,EGFP,慢病毒,转小,永生化,细胞株,昆明小鼠,肝门静脉,静脉注射,稳定表达,qPCR,小鼠模型,肝组织,转染,mimic,inhibitor,划痕,Transwell,实验检测,蛋白质印迹法,二磷酸腺苷,核糖,糖基化,哺乳动物雷帕霉素靶蛋白,处死,模型小鼠,侵袭能力,低表达,肝癌细胞,侵袭和迁移,迁移能力,蛋白激酶

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