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草鱼Ⅱ型干扰素的单克隆抗体制备与鉴定
文献摘要:
Ⅱ型干扰素(IFN-γ)是参与辅助性T淋巴细胞1(Th1)免疫应答的关键细胞因子之一.为研究产生IFN-γ和干扰素-γ相关因子(IFN-γrel)的细胞来源及功能差异,实验构建原核表达质粒,在大肠杆菌DE3中表达草鱼(Ci)IFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白.结果显示,重组CiIFN-γ蛋白为可溶性蛋白,而CiIFN-γrel蛋白则不可溶.通过亲和层析和分子筛层析获得了高纯度CiIFN-γ和CiIFN-γrel重组蛋白,免疫小鼠制备了单克隆抗体.通过Western blotting筛选获得4株特异性高、亲和力强的抗体.研究表明CiIFN-γ单克隆抗体与CiIFN-γrel没有交叉反应,反之亦然,其中FITC标记的2株抗体可用于免疫荧光和流式细胞术分析.此外,Western blotting分析显示,草鱼IFN-γ和IFN-γrel单克隆抗体不识别斑马鱼的同源Ⅱ型干扰素蛋白.本研究制备了首个IFN-γrel的单克隆抗体,为深入研究草鱼Ⅱ型干扰素的产生和生物学功能奠定基础.
文献关键词:
草鱼;Ⅱ型干扰素;重组蛋白;单克隆抗体;免疫分析
中图分类号:
作者姓名:
朱晓真;王俊亚;贾钊;王梓璇;王邦杰;邹钧
作者机构:
上海海洋大学水产与生命学院,上海 201306
文献出处:
引用格式:
[1]朱晓真;王俊亚;贾钊;王梓璇;王邦杰;邹钧-.草鱼Ⅱ型干扰素的单克隆抗体制备与鉴定)[J].水产学报,2022(08):1487-1498
A类:
CiIFN
B类:
草鱼,干扰素,单克隆抗体,抗体制备,辅助性,Th1,免疫应答,相关因子,rel,功能差异,原核表达,质粒,大肠杆菌,DE3,重组蛋白,可溶性蛋白,亲和层析,分子筛层析,高纯度,blotting,亲和力,交叉反应,反之亦然,FITC,免疫荧光,流式细胞术,不识,斑马鱼,生物学功能,免疫分析
AB值:
0.229363
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