为研究斜带石斑鱼Epinephelus coioides T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(T-cell immunoglobulin and mucin-domain-containing molecule 4,TIM-4)在免疫应答过程中的作用,通过聚合酶链式反应(PCR)获得斜带石斑鱼TIM-4的蛋白编码区(GenBank登录号:MZ465580),利用生物信息学分析其结构特征,采用荧光定量PCR(qPCR)分析TIM-4在健康鱼体中的组织分布,以及经LPS和Poly I:C刺激后的表达变化,并构建原核表达载体质粒TIM-4-4T,转化至大肠杆菌BL21(DE3)中进行TIM-4重组蛋白诱导表达.结果表明:斜带石斑鱼TIM-4基因的蛋白编码区片段长度为702 bp,可编码234个氨基酸,含有V-Type(IGV)、BTK和PRY 3个功能结构域;qPCR显示,TIM-4基因在斜带石斑鱼10种组织中均有表达,在胃中的表达量最高(P<0.05),在脾脏中表达量最低;经LPS刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著降低(P<0.05),而经Poly I:C刺激后,脾脏细胞中的TIM-4表达量显著升高(P<0.05);SDS-PAGE电泳显示,TIM-4重组蛋白相对分子质量约为25100,以包涵体形式表达,在0.4 mmol/L IPTG、37℃下诱导6 h时,TIM-4重组蛋白的表达量最大.研究表明,TIM-4基因可能参与了斜带石斑鱼抗感染免疫反应,本研究结果为深入了解TIM-4的生物学功能提供了理论基础.

斜带石斑鱼;T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4;基因表达;LPS;Poly I:C;重组蛋白

李金泽;汤菊芬;黄瑜;简纪常;施钢;蔡佳

广东海洋大学 水产学院,广东省水产动物病害防控与健康养殖重点实验室,广东省水产经济动物病害控制重点实验室,南方海洋科学与工程广东省实验室 (湛江) ,广东湛江524088;广西科学院广西北部湾海洋研究中心,广西海洋天然产物与组合生物合成化学重点实验室,广西 南宁530007

大连海洋大学学报

[1]李金泽;汤菊芬;黄瑜;简纪常;施钢;蔡佳-.斜带石斑鱼T细胞免疫球蛋白黏蛋白-4(TIM-4)基因表达及重组蛋白制备)[J].大连海洋大学学报,2022(03):403-410

MZ465580

斜带石斑鱼,细胞免疫,免疫球蛋白,黏蛋白,TIM,重组蛋白,Epinephelus,coioides,cell,immunoglobulin,mucin,domain,containing,molecule,免疫应答,聚合酶链式反应,蛋白编码,编码区,GenBank,登录号,利用生物,生物信息学分析,qPCR,鱼体,组织分布,LPS,Poly,表达变化,原核表达载体,质粒,4T,大肠杆菌,BL21,DE3,蛋白诱导表达,段长度,bp,可编,Type,IGV,BTK,PRY,功能结构,结构域,脾脏,SDS,PAGE,电泳显示,白相,相对分子质量,包涵体,IPTG,抗感染,感染免疫,免疫反应,生物学功能

0.320025