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线粒体融合蛋白2对棕榈酸处理的胰岛β细胞的影响及机制研究
文献摘要：
目的:探讨线粒体融合蛋白2（Mfn2）对棕榈酸（PA）处理的小鼠胰岛β细胞的影响及机制。方法:使用浓度梯度的PA分别处理小鼠胰岛β细胞MIN6细胞，通过CCK8法检测细胞活性，并确定后续实验的PA浓度。通过转染慢病毒构建Mfn2敲低和Mfn2过表达稳定转染细胞系，将MIN6细胞分为Mfn2敲低空载对照（ShNC-Mfn2）组、敲低Mfn2（Sh-Mfn2）组、Mfn2过表达空载对照（OENC-Mfn2）组、Mfn2过表达（OE-Mfn2）组、ShNC-Mfn2+PA组、Sh-Mfn2+PA组、OENC-Mfn2+PA组、OE-Mfn2+PA组。使用小牛血清白蛋白作为PA对照和PA分别处理细胞。使用流式细胞仪检测各组细胞凋亡率、细胞内活性氧簇（ROS）和线粒体膜电位水平，酶标仪检测细胞内ATP水平，实时荧光定量聚合酶链反应与Western blotting法检测Mfn2及凋亡相关蛋白［B细胞淋巴瘤2（Bcl-2）、半胱氨酸依赖的天冬氨酸蛋白酶3（Caspase-3）、Bcl-2相关X蛋白（Bax）］的mRNA和蛋白表达量。两组间比较采用
t检验，多组间比较采用单因素方差分析。
结果:与0 mmol/L PA相比，PA浓度为0.125、0.250、0.500、0.750、1.000 mmol/L时细胞存活率明显下降（
P<0.01），选择细胞存活率大概为50%的PA浓度即0.5 mmol/L为后续实验浓度，此时细胞存活率为43.53%±0.56%。MIN6细胞加入0.5 mmol/L PA后，Mfn2 mRNA和蛋白表达量均明显下降（
P<0.01）。与ShNC-Mfn2组相比，Sh-Mfn2组Mfn2 mRNA及蛋白表达水平下降（
P<0.05）；与OENC-Mfn2组相比，OE-Mfn2组Mfn2 mRNA及蛋白表达水平升高（
P<0.01）。与ShNC-Mfn2+PA组相比，Sh-Mfn2+PA组的ROS水平显著升高（
P<0.01），ATP水平及线粒体膜电位显著下降（
P<0.05）；与OENC-Mfn2+PA组相比，OE-Mfn2+PA组的ROS水平降低，ATP水平及线粒体膜电位明显升高（
P<0.05）。与ShNC-Mfn2+PA组相比，Sh-Mfn2+PA组细胞凋亡率升高（
P<0.01）；与OENC-Mfn2+PA组相比，OE-Mfn2+PA组细胞凋亡率降低（
P<0.01）。与ShNC-Mfn2+PA组相比，Sh-Mfn2+PA组Bax和Caspase-3的mRNA与蛋白表达量显著升高，Bcl-2的mRNA与蛋白表达量显著降低（均
P<0.05）；与OENC-Mfn2+PA组相比，OE-Mfn2+PA组Bax和Caspase-3的mRNA与蛋白显著降低，Bcl-2的mRNA与蛋白表达量显著升高（均
P<0.05）。
结论:Mfn2可以改善PA诱导的MIN6细胞脂毒性损伤，过表达Mfn2对脂毒性下的MIN6细胞有保护作用，敲低Mfn2会加重脂毒性对MIN6细胞的损伤。
文献关键词：
胰岛;细胞凋亡;β细胞;线粒体融合蛋白2;脂毒性
中图分类号：
作者姓名：
冯杰媛;宋林阳;王华蔚;程思源;柯孟婷;胡勇;徐焱成
作者机构：
武汉大学中南医院内分泌科，武汉 430071
文献出处：
引用格式：
[1]冯杰媛;宋林阳;王华蔚;程思源;柯孟婷;胡勇;徐焱成-.线粒体融合蛋白2对棕榈酸处理的胰岛β细胞的影响及机制研究)[J].中华糖尿病杂志,2022(05):482-489
A类：
ShNC,OENC,Mfn2+PA
B类：
线粒体融合,融合蛋白,棕榈酸,酸处理,浓度梯度,别处,MIN6,CCK8,细胞活性,慢病毒,敲低,过表达,稳定转染,细胞系,低空,空载,小牛,牛血清白蛋白,流式细胞仪,细胞凋亡率,细胞内活性氧,活性氧簇,ROS,线粒体膜电位,酶标仪,ATP,实时荧光定量聚合酶链反应,blotting,凋亡相关蛋白,细胞淋巴瘤,Bcl,天冬氨酸蛋白酶,Caspase,Bax,单因素方差分析,细胞存活率,大概,蛋白表达水平,平降,脂毒性,毒性损伤
AB值：
0.13578
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