[背景]建立细菌性动物腹泻模型是研究细菌性腹泻机制及抗腹泻药机理的常用方法.[目的]从临床腹泻犊牛粪便中分离出5株不同血清型大肠杆菌(Escherichia coli),经口灌服小鼠建立与临床犊牛腹泻症状近似的小鼠腹泻模型.[方法]72只昆明小鼠随机分为6组,每组12只,分为正常对照组(NC)、E.coli O1干预组、E.coli O2干预组、E.coli O8干预组、E.coli O78干预组和E.coli O86干预组,攻毒组大肠杆菌浓度均为3×1013 CFU/mL,每10 g体重灌服0.2 mL攻毒菌液,2次/d,连续灌服7d,分别于灌服后3、5和7d记录小鼠体重及腹泻率,并收集各组小鼠血清,检测白细胞介素1β (interleukin 1β,IL-lβ)、IL-6、肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor alpha,TNF-α)及第7天血清免疫球蛋白G(immunoglobin G,IgG)、IgA和分泌型免疫球蛋白A(secretory immunoglobulin A,sIgA)的含量;于攻毒后第7天收集各组小鼠十二指肠及盲肠内容物,用于制作HE切片及16S rRNA基因分析;以E.coli O8作为攻毒菌株通过灌胃和注射的方法建立腹泻模型,使用氧氟沙星对腹泻小鼠进行治疗.[结果]攻毒5d和7d后,各攻毒组小鼠体重与NC组比较均显著降低(P＜0.05),腹泻率增加;HE染色结果显示,各攻毒组小鼠肠绒毛均出现不同程度的损伤,其中以E.coli O2和E.coli O8导致的损伤最为严重,E.coli O1次之;血清IL-1β、IL-6和TNF-α的含量均显著增加(P＜0.05),以E.coli O1和E.coli O8的含量增加最为显著;IgG、IgA和sIgA含量显著下降(P＜0.05),以E.coli O8下降最为显著;小鼠盲肠内容物的16S rRNA基因分析显示,与NC组比较各攻毒组小鼠菌群多样性水平降低,在门水平上攻毒小鼠厚壁菌门(Firmicutes)丰度下降,拟杆菌门(Bacteroidetes)、变形菌门(Proteobacteria)和放线菌门(Actinobacteria)丰度上升;腹腔注射E.coli O8小鼠在12 h内全部死亡,并且抗生素不能逆转这种死亡,而通过灌胃造成的腹泻小鼠经抗生素治疗后可恢复正常.[结论]5株牛源大肠杆菌经口灌服小鼠后均会造成不同程度的腹泻,其中E.coli O2、E.coli O8和E.coli O1对小鼠肠绒毛破坏较为严重,E.coli O8攻毒后血清IL-1β、IL-6和TNF-α含量较高,因此,以0.2 mL/10 g,2次/d,连续灌服7d浓度为3×1013 CFU/mL的E.coli O8可较好地建立小鼠腹泻模型,并可用于评价药物疗效.

大肠杆菌;腹泻;IL-1β;IL-6;TNF-α;细菌群落

任书男;敖日格乐;吕文亭;刘佳乐;田艳萍;付鹤;王纯洁

内蒙古农业大学动物医学学院,内蒙古呼和浩特010018;内蒙古农业大学动物科学学院,内蒙古呼和浩特010018

微生物学通报

[1]任书男;敖日格乐;吕文亭;刘佳乐;田艳萍;付鹤;王纯洁-.腹泻犊牛源大肠杆菌对小鼠的致病性)[J].微生物学通报,2022(02):645-658

腹泻药,O86

犊牛源大肠杆菌,致病性,细菌性腹泻,抗腹泻,常用方法,牛粪,粪便,血清型,Escherichia,coli,经口,犊牛腹泻,腹泻症状,昆明小鼠,正常对照,NC,O1,O2,O78,攻毒,CFU,重灌,毒菌,菌液,7d,腹泻率,小鼠血清,interleukin,tumor,necrosis,alpha,及第,血清免疫球蛋白,immunoglobin,IgG,分泌型免疫球蛋白,secretory,immunoglobulin,sIgA,十二指肠,盲肠内容物,HE,16S,rRNA,基因分析,灌胃,氧氟沙星,5d,染色结果,肠绒毛,菌群多样性,平降,上攻,厚壁菌门,Firmicutes,拟杆菌门,Bacteroidetes,变形菌门,Proteobacteria,放线菌,Actinobacteria,腹腔注射,抗生素治疗,药物疗效,细菌群落

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