目的:探讨 TCOF1 mRNA表达下降对人胚胎干细胞系H9来源神经嵴细胞(H9-NCC)凋亡的影响，并阐明对 TCOF1表达发挥转录后调控作用的微RNA(miRNA)以及致畸因子视黄酸(RA)调控 TCOF1表达的作用和机制。 方法:将人胚胎干细胞系H9诱导为H9-NCC，通过免疫荧光染色、流式细胞分析检测神经嵴细胞(NCCs)表面标志物P75、HNK-1、AP2，通过实时定量PCR(RT-qPCR)检测NCCs标志物基因 SOX9、 ZIC1、 AP2、 P75、 PAX3和 SOX10表达情况。采用针对 TCOF1基因的慢病毒RNA干扰载体(sh- TCOF1)在H9-NCC中敲减 TCOF1，并设阴性对照组(sh-Scramble), 观察细胞凋亡状况。通过生物信息学分析，预测可能与 TCOF1 mRNA结合的miRNA为miR-654-5p，利用该miRNA的模拟物，并设阴性对照，采用RT-qPCR方法观察对 TCOF1 mRNA水平的影响。用0.1 μmol/L终浓度的RA处理H9-NCC，观察对 TCOF1 mRNA表达的影响。预测 TCOF1上游转录因子( HOXA3)并通过RNA干扰技术敲减该转录因子，采用RT-qPCR方法检测 TCOF1 mRNA表达水平，探讨RA调控 TCOF1 mRNA表达的机制。 结果:(1)H9-NCC细胞系诱导成功，免疫荧光染色、流式细胞分析及RT-qPCR检测显示诱导产生的H9-NCC表达NCCs特异性标志物。(2)与阴性对照组相比，sh- TCOF1可以敲减H9-NCC中 TCOF1的表达水平( P<0.001)，敲减 TCOF1后可增加细胞晚期凋亡水平( P＝0.029)，上调caspase3表达( P<0.001)。(3)与阴性对照组相比，miR-654-5p模拟物可降低H9-NCC中 TCOF1 mRNA水平( P＝0.019)。(4)与阴性对照组相比，RA处理H9-NCC后 TCOF1 mRNA表达上调( P＝0.041)；敲减 HOXA3可抑制RA对H9-NCC中 TCOF1 mRNA的上调能力( P＝0.008)。 结论:TCOF1表达降低诱导H9-NCC凋亡；miR-654-5p通过转录后调控下调 TCOF1 mRNA表达；RA通过 HOXA3促进 TCOF1表达。

颅面骨畸形;神经嵴;人神经嵴细胞;TCOF1基因 ;Treacher Collins综合征

韩蓉;傅歆;肖苒

中国医学科学院整形外科医院研究中心　中国医学科学院体表组织器官再造研究重点实验室，北京　100144

中华整形外科杂志

[1]韩蓉;傅歆;肖苒-.人神经嵴细胞中 TCOF1基因表达调控机制研究 )[J].中华整形外科杂志,2022(06):671-679

人神经嵴细胞,ZIC1,HOXA3,颅面骨畸形

TCOF1,基因表达调控,调控机制,人胚胎干细胞,细胞系,H9,转录后调控,miRNA,致畸,视黄酸,RA,免疫荧光染色,流式细胞分析,分析检测,NCCs,表面标志物,P75,HNK,AP2,实时定量,qPCR,SOX9,PAX3,SOX10,慢病毒,干扰载体,sh,敲减,Scramble,生物信息学分析,5p,游转,干扰技术,加细,caspase3,可抑制,Treacher,Collins

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