典型文献
肝母细胞瘤表达BRD4的促肿瘤机制及靶向抑制研究
文献摘要：
目的:探讨溴结构域蛋白4 （bromodomain-containing protein 4, BRD4）促进肝母细胞瘤（hepatoblastoma，HB）机制及靶向抑制效应。方法:收集未经化疗的45例HB穿刺活检或手术切除组织石蜡标本。将未经化疗的45例具有特征性肿瘤细胞的组织石蜡标本作为HB组；在45例石蜡标本中有30例组织边缘可见瘤旁肝组织肝小叶结构正常、可见小叶中央静脉和汇管区的组织，该30例作为瘤旁对照组。采用免疫组织化学半定量检测BRD4的表达水平，并对BRD4的表达水平与患儿临床病理特点的相关性进行统计学分析。运用实时定量聚合酶链反应（quantificational real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）、蛋白质印迹法和免疫荧光技术检测人HB细胞株HepG2对照组（未经处理的HepG2细胞）、空载组（转染Si-NC的HepG2细胞）以及Si-BRD4敲低组（转染Si-BRD4的HepG2细胞）的BRD4表达水平，检测Yes相关蛋白1 （Yes-associated protein 1，YAP1）和c-Myc的mRNA和蛋白表达水平。运用CCK-8法和流式细胞术分别检测HepG2对照组和Si-BRD4敲低组的细胞活力和凋亡率。使用JQ1、长春新碱（vincristine, VCR）、JQ1联合VCR分别处理HepG2细胞48 h后，通过CCK-8法、EDU-555细胞增殖试剂盒和TUNEL染色检测各组细胞的活力、增殖能力及凋亡率。将使用30 nmol/L JQ1干预的HepG2细胞作为JQ1组，将使用70 μg/ml VCR干预的HepG2细胞作为VCR组，将使用30 nmol/L JQ1和70 μg/ml VCR干预的HepG2细胞作为JQ1联合VCR组。结果:①免疫组织化学检测结果显示BRD4在HB细胞核阳性率为97.8%（44/45），瘤旁肝细胞核阳性率为0，差异具有统计学意义（
P<0.001 ）。②根据美国儿童肿瘤协作组（Children's Oncology Group，COG）分期，Ⅰ~Ⅱ期低表达8例，高表达4例，Ⅲ~Ⅳ期低表达3例，高表达30例，BRD4表达水平与肿瘤的COG分期有关（
P<0.001）。低表达患儿无转移发生，高表达患儿转移11例，BRD4表达水平与肿瘤转移相关（
P=0.042）。③qRT-PCR检测结果显示YAP1和c-Myc的mRNA表达水平在Si-BRD4敲低组较HepG2对照组和空载组明显下降；蛋白质印迹法及免疫荧光检测结果也显示YAP1和c-Myc的蛋白表达水平在Si-BRD4敲低组较HepG2对照组和空载组显著下降。④CCK-8法检测结果显示HepG2细胞48 h的光密度（optical density，OD）值在Si-BRD4敲低组明显低于HepG2对照组，0.423±0.015比0.532±0.026，细胞活力明显下降，两组之间的差异具有统计学意义（
t=5.03，
P= 0.007）。流式细胞术检测结果显示SiRNA敲低BRD4处理48 h后，Si-BRD4敲低组HepG2细胞的凋亡率为（24.58±3.95）%，显著高于HepG2对照组的（6.46±2.13）%，差异具有统计学意义（
t=7.13，
P＝0.002）。⑤CCK-8检测结果显示JQ1组、VCR组和JQ1联合VCR组的HepG2细胞活力较HepG2对照组显著降低，分别为0.364±0.020、0.383±0.014、0.269±0.019和0.943±0.014，和HepG2对照组之间的差异均具有统计学意义（
P<0.001），JQ1联合VCR组细胞的活力低于JQ1组和VCR组，分别为0.269±0.019、0.364±0.020、0.383±0.014，差异具有统计学意义，（
t=5.88，
P=0.004）和（
t= 8.26，
P=0.002）。EDU检测结果显示运用JQ1、VCR及JQ1联合VCR分别作用于HepG2细胞后，明显抑制了HepG2细胞增殖，提升了细胞凋亡率，JQ1联合VCR对细胞增殖的抑制和细胞凋亡的促进作用更明显。TUNEL染色结果显示JQ1联合VCR用药的细胞凋亡率高于单独使用JQ1和VCR。
结论:BRD4在HB中高表达且与肿瘤的COG分期及转移相关，可通过YAP1、c-Myc发挥促肿瘤作用，JQ1联合VCR用药作用效果强于单独使用JQ1和VCR。
文献关键词：
肝肿瘤;肝母细胞瘤;溴结构域蛋白4;Yes相关蛋白1;JQ1;长春新碱
中图分类号：
作者姓名：
蔡晨宇;徐曼;冀淑勤;许文凤;贺新月;曹鲜;周红玲
作者机构：
重庆医科大学病理教研室，重庆医科大学病理诊断中心，重庆 400016
文献出处：
引用格式：
[1]蔡晨宇;徐曼;冀淑勤;许文凤;贺新月;曹鲜;周红玲-.肝母细胞瘤表达BRD4的促肿瘤机制及靶向抑制研究)[J].中华小儿外科杂志,2022(07):623-629
A类：
B类：
肝母细胞瘤,BRD4,肿瘤机制,靶向抑制,结构域,bromodomain,containing,protein,hepatoblastoma,HB,抑制效应,穿刺活检,手术切除,石蜡,具有特征,特征性,肿瘤细胞,织边,肝组织,小叶,叶结构,汇管,管区,半定量检测,临床病理特点,统计学分析,实时定量聚合酶链反应,quantificational,real,polymerase,chain,reaction,qRT,蛋白质印迹法,免疫荧光技术,细胞株,HepG2,空载,转染,NC,敲低,Yes,associated,YAP1,Myc,蛋白表达水平,CCK,流式细胞术,细胞活力,JQ1,长春新碱,vincristine,VCR,别处,EDU,试剂盒,TUNEL,nmol,ml,免疫组织化学检测,细胞核,肝细胞,儿童肿瘤,协作组,Children,Oncology,Group,COG,低表达,肿瘤转移,移相,免疫荧光检测,光密度,optical,density,OD,SiRNA,细胞凋亡率,染色结果,肝肿瘤
AB值：
0.237193
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