目的:探究微小RNA(miR)-373-3p对胶质母细胞瘤细胞自噬和舒尼替尼敏感性的影响及其机制。方法:体外常规培养U251细胞，采用50 μmol/L舒尼替尼作用72 h构建耐舒尼替尼U251细胞株。(1)采用实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测U251、耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达。将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、无义序列组、miR-373-3p模拟物组，后2组细胞分别转染miR-373-3p无义序列、miR-373-3p模拟物，采用RT-qPCR检测细胞miR-373-3p的表达。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组，转染后采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL染色检测细胞凋亡率，免疫荧光染色检测细胞微管相关蛋白轻链3(LC3)的表达，Western blotting检测细胞凋亡、自噬相关蛋白的表达。(2)构建pGL3-自噬相关基因7(ATG7)野生型(WT)和pGL3-ATG7突变型(MUT)质粒，双荧光素酶报告分析系统检测miR-373-3p模拟物组、无义序列组细胞荧光素酶活性。将细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组，转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。(3)将耐舒尼替尼U251细胞分为空白对照组、ATG7阴性对照组、ATG7过表达组，转染后采用RT-qPCR、Western blotting分别检测细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达。将U251细胞、耐舒尼替尼U251细胞分为U251组、耐舒尼替尼U251组、无义序列+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组、miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组，转染后采用CCK-8法检测细胞活性，TUNEL染色检测细胞凋亡率，Western blotting检测细胞凋亡和自噬相关蛋白的表达。结果:(1)与U251细胞比较，耐舒尼替尼U251细胞miR-373-3p的表达下调，差异有统计学意义( P<0.05)。与空白对照组、无义序列组比较，miR-373-3p模拟物组细胞miR-373-3p的表达升高，差异有统计学意义( P<0.05)。与U251组比较，耐舒尼替尼U251组细胞活性增加，凋亡率下降，B淋巴细胞瘤-2(Bcl-2)蛋白的表达升高，Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白的表达和活化半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-3(Caspase 3)/Caspase 3值降低，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值增加，p62蛋白的表达减少。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率提高，Bcl-2蛋白的表达降低，Bax蛋白的表达和活化Caspase 3/Caspase 3值升高，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，p62蛋白的表达增加，差异均有统计学意义( P<0.05)；与U251组比较，耐舒尼替尼U251组LC3荧光颗粒增多且荧光亮度升高；与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞荧光颗粒减少且亮度减弱。(2)对于pGL3-ATG7 WT质粒，miR-373-3p模拟物组荧光素酶活性低于无义序列组，差异有统计学意义( P<0.05)。与U251组比较，耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达增加；与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组ATG7 mRNA和蛋白的表达降低，差异均有统计学意义( P<0.05)。(3)与空白对照组、ATG7阴性对照组比较，ATG7过表达组细胞ATG7 mRNA和蛋白的表达均增加，差异均有统计学意义( P<0.05)。与无义序列+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+耐舒尼替尼U251组细胞活性降低、凋亡率较高，Bcl-2蛋白的表达降低，活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达升高，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值降低，p62蛋白的表达升高；与miR-373-3p模拟物+ATG7阴性对照+耐舒尼替尼U251组比较，miR-373-3p模拟物+ATG7过表达+耐舒尼替尼U251组细胞活性增加，凋亡率降低，Bcl-2蛋白的表达升高，活化Caspase 3/Caspase 3值、Bax蛋白的表达降低，Beclin 1蛋白的表达、LC3Ⅱ/LC3Ⅰ值升高，p62蛋白的表达减少，差异均有统计学意义( P<0.05)。 结论:miR-373-3p通过调控自噬而增强胶质母细胞瘤细胞舒尼替尼敏感性，其机制可能与靶向ATG7有关。

miR-373-3p;白噬相关基因7;胶质母细胞瘤;舒尼替尼;自噬;敏感性

张雷;孙季冬;葛俊苗;杨秋子;张研宇;毛星刚;罗鹏;蒋晓帆

空军军医大学第一附属医院神经外科，西安　710032

中华神经医学杂志

[1]张雷;孙季冬;葛俊苗;杨秋子;张研宇;毛星刚;罗鹏;蒋晓帆-.miR-373-3p通过靶向ATG7参与调控胶质母细胞瘤细胞自噬和舒尼替尼敏感性)[J].中华神经医学杂志,2022(08):770-781

+ATG7

miR,3p,胶质母细胞瘤,细胞自噬,舒尼替尼,规培,U251,细胞株,qPCR,空白对照,无义,转染,CCK,细胞活性,TUNEL,细胞凋亡率,免疫荧光染色,微管,轻链,LC3,blotting,自噬相关蛋白,pGL3,自噬相关基因,野生型,WT,突变型,MUT,质粒,双荧光素酶报告分析,系统检测,荧光素酶活性,过表达,凋亡和自噬,Bcl,Bax,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶,Caspase,Beclin,p62,荧光颗粒,光亮度

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