目的 探讨蛋白激酶Cε(PKCε)在瑞芬太尼诱导的大鼠脊髓μ阿片受体(MOR)下调中的作用.方法 成年雄性SD大鼠分为对照组(Naive组)、瑞芬太尼组(R组)、鞘内注射εV1-2组(εV1-2组)、瑞芬太尼+鞘内注射εV1-2组(R+εV1-2组).静脉输注瑞芬太尼建立痛觉过敏模型,通过蛋白免疫印迹法检测瑞芬太尼输注后2 h至5 d大鼠脊髓PKCε和MOR总蛋白、膜浆蛋白以及磷酸化蛋白的表达变化.采用免疫荧光组织化学法观察PKCε和MOR在脊髓背角的分布.免疫共沉淀法观察瑞芬太尼输注后大鼠脊髓PKCε和MOR的相互作用情况.瑞芬太尼输注前30 min预先鞘内注射PKCε特异性抑制剂εV1-2,观察其对脊髓PKCε和MOR总蛋白、膜浆蛋白以及其磷酸化水平表达变化的影响.结果 静脉输注瑞芬太尼后1 d,与Naive组相比,脊髓背角PKCε蛋白表达增加[(1.04±0.06)vs.(1.79±0.15),F=13.05,P＜0.05],MOR 表达下调[(1.07±0.08)vs.(0.57±0.04),F=17.85,P＜0.05],差异均有统计学意义;同时,PKCε[(1.10±0.11)vs.(1.53±0.06),F=12.87,P＜0.05]和 MOR[(1.00±0.17)vs.(1.62±0.08),F=28.95,P＜0.05]磷酸化水平显著升高,PKCε膜表达显著增加[(0.97±0.07)vs.(1.60±0.06),F=23.30,P＜0.05],MOR膜表达显著减少[(0.97±0.07)vs.(0.38±0.04),F=28.50,P＜0.05],差异均有统计学意义.免疫荧光双染结果显示,PKCε与MOR在脊髓背角存在共定位,且免疫共沉淀结果表明瑞芬太尼可增强大鼠脊髓背角PKCε和MOR的相互作用.而鞘内注射εV1-2后,与R1d组相比,(R1d+εV1-2)组大鼠脊髓磷酸化PKCε表达水平下降[(1.48±0.09)vs.(1.19±0.07),F=23.80,P＜0.05],PKCε 膜表达水平下降[(1.65±0.08)vs.(1.15±0.08),F=13.48,P＜0.05],磷酸化 MOR 表达水平下降[(1.58±0.05)vs.(1.18±0.06),F=21.12,P＜0.05],MOR 蛋白表达水平升高[(0.53+0.09)vs.(1.11±0.05),F=18.18,P＜0.05],差异均有统计学意义.结论 瑞芬太尼可能通过诱导PKCε的激活,促进脊髓背角MOR磷酸化,进而在介导MOR内化和下调中起关键作用.

瑞芬太尼;脊髓;蛋白激酶Cε;μ阿片受体

陈彦梅;于萍;王晓娥;王文慧;李林芝;罗国娅;崔宇;陈元

中山大学医学院神经生物研究中心,广东深圳518107;中山大学附属第一医院麻醉科,广东广州510080

热带医学杂志

[1]陈彦梅;于萍;王晓娥;王文慧;李林芝;罗国娅;崔宇;陈元-.PKCε在瑞芬太尼诱导的大鼠脊髓μ阿片受体下调中的作用)[J].热带医学杂志,2022(05):606-611,封2

R1d,R1d+

PKC,瑞芬太尼,阿片受体,蛋白激酶,MOR,Naive,鞘内注射,V1,R+,静脉输注,痛觉过敏,蛋白免疫印迹法,总蛋白,磷酸化,表达变化,组织化学,化学法,脊髓背角,免疫共沉淀,共沉淀法,免疫荧光双染,共定位,明瑞,蛋白表达水平,53+0

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