典型文献
采用CRISPR/Cas9系统构建HIF-1α基因敲除质粒及功能验证
文献摘要：
目的 采用簇状规则间隔短回文重复序列(CRISPR)/Cas9基因编辑技术构建质粒并敲除HEK-293细胞的HIF-1α基因.方法 通过在线软件设计3号外显子上靶向HIF-1α的sgRNA,并将其构建到CRISPR/Cas9载体中.经Sanger测序验证质粒构建正确后,将重组质粒通过Lipofectamine 3000转染到HEK-293细胞中.通过药物筛选提取细胞DNA和蛋白,用T7E1酶和Western blotting检测基因变化和蛋白表达情况.结果 Sanger测序结果显示,所设计的sgRNA成功插入到CRISPR/Cas9载体中,序列验证正确,重组质粒构建成功.T7E1酶切实验成功切除3条带,sgRNA的打靶效率为33.8％.Western blotting结果显示,经过氯化钴诱导、转染药筛后的HEK-293细胞蛋白表达水平较野生型细胞明显下降,差异有统计学意义(P<0.05).结论 成功构建靶向HIF-1α基因的CRISPR/Cas9载体,载体靶向敲除HIF-1α基因功能验证成功.
文献关键词：
CRISPR/Cas9;缺氧诱导因子-1α;载体构建;基因编辑;功能验证
中图分类号：
作者姓名：
陈年杰;洪裕程;沈悦;王进涛;钟良军
作者机构：
杭州师范大学医学部口腔医学院,浙江 杭州 311121;杭州师范大学附属医院口腔医学中心,浙江 杭州 310015
文献出处：
引用格式：
[1]陈年杰;洪裕程;沈悦;王进涛;钟良军-.采用CRISPR/Cas9系统构建HIF-1α基因敲除质粒及功能验证)[J].现代医药卫生,2022(11):1838-1842
A类：
B类：
CRISPR,Cas9,系统构建,HIF,基因敲除,功能验证,回文,重复序列,基因编辑技术,技术构建,HEK,软件设计,外显子,sgRNA,Sanger,Lipofectamine,转染,药物筛选,T7E1,blotting,重组质粒构建,条带,打靶,氯化钴,蛋白表达水平,野生型,靶向敲除,基因功能,证成,缺氧诱导因子,载体构建
AB值：
0.343323
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