典型文献
人β-NGF融合蛋白真核表达载体的构建及其表达研究
文献摘要：
研究构建一种能高效、稳定表达且易分离纯化人神经生长因子的pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,此载体能在CHO细胞中表达具有高活性的rh-β-NGF.实验利用Trizol溶液从人胎盘中提取总RNA,利用分光光度计测定总RNA浓度后经RT-PCR克隆β-NGF基因,然后添加TM-FactorXa跨膜元件,实验成功构建了pcDNA3.1-TM-FactorXa-β-NGF真核表达载体,用LipofectamineTM 2000把此载体转染CHO细胞进行表达,收集表达酶切液,透析后经DEAE-Sepharose F F和Sephadex G-75层析,经Bradford法蛋白定量后,利用Western-blot和ELISA等方法对目标蛋白进行质量检测,研究结果表明:人β-NGF融合蛋白能高效表达,细胞总蛋白中β-NGF含量进行ELISA检测结果为602μg/Ml,对照组<1.15E-03μg/Ml.SDS-PAGE电泳结果在13KD有明显的目标蛋白条带.此载体是一种能高效、稳定表达重组人神经生长因子,且易分离纯化的真核表达载体.实验添加TM-FactorXa跨膜元件达到可控酶切,以便更有利于目的蛋白的分离收集纯化,为下一步开展rh-β-NGF活性鉴定奠定基础.
文献关键词：
β-NGF;真核表达载体;CHO细胞
中图分类号：
作者姓名：
蓝培基;吴良银;吴朝晖
作者机构：
韶关学院医学院基础医学部,广东韶关 512026;粤北人民医院检验科,广东韶关 512026
文献出处：
引用格式：
[1]蓝培基;吴良银;吴朝晖-.人β-NGF融合蛋白真核表达载体的构建及其表达研究)[J].医学检验与临床,2022(04):1-5
A类：
FactorXa,13KD
B类：
NGF,融合蛋白,真核表达载体,表达研究,研究构建,稳定表达,分离纯化,人神,神经生长因子,pcDNA3,CHO,高活性,rh,Trizol,胎盘,盘中,分光光度计,计测,膜元件,LipofectamineTM,转染,DEAE,Sepharose,Sephadex,层析,Bradford,blot,质量检测,高效表达,总蛋白,Ml,15E,SDS,PAGE,电泳,白条,条带,组人,目的蛋白,活性鉴定
AB值：
0.359532
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