目的 建立针对登革病毒(DENV)、黄热病毒(YFV)、基孔肯雅病毒(CHIKV)、寨卡病毒(ZIKV)的四重逆转录重组酶聚合酶扩增(RT-RPA)技术,用于同时快速检测上述4种病毒.方法 通过正交设计建立检测4种蚊媒病毒(DENV、YFV、CHIKV、ZIKV)的四重RT-RPA反应体系.通过质粒标准品、体外转录RNA和临床血清验证单重RT-RPA和四重RT-RPA的检测灵敏度、特异度、重复性和临床应用符合率.结果 单重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV、ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、<1×102 Copies/ml,对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV体外合成RNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102 Copies/ml,四重RT-RPA对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV质粒DNA的检出限分别为1×102、1×102、1×102、1×102 Copies/ml,对体外合成RNA的检出限分别为5×102、5×102、5×102、5×102 Copies/ml.本研究建立的单重及四重RT-RPA反应体系与其他常见病毒不存在交叉反应,RT-RPA法测定的阈值时间值(TT)的变异系数为1.76％～5.96％.四重RT-RPA法对不同病毒体外转录RNA检出率不同,DENV、YFV和CHIKV为100.00％,ZIKV为83.33％.单重RT-RPA、四重RT-RPA、RT-PCR对DENV临床样本的检出率无统计学差异(P>0.05).结论 本研究建立的针对DENV、YFV、CHIKV和ZIKV的单重RT-RPA和四重RT-RPA检测方法特异度好、灵敏度高、重复性好,对蚊媒传染病的早期诊断及鉴别诊断具有重要作用,同时也为其他新发再发传染病的快速诊断方法建立提供研究方向.

四重逆转录重组酶聚合酶扩增;蚊媒传染病;登革病毒;黄热病毒;基孔肯雅病毒;寨卡病毒

韩明月;林源吉;吴新新;魏晨星;董学妍;王晓明;万海同;余道军

310053 杭州,浙江中医药大学第四临床学院;杭州铭创生命科技有限公司;浙江大学医学院;浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院检验科;浙江中医药大学生物工程学院

浙江医学

[1]韩明月;林源吉;吴新新;魏晨星;董学妍;王晓明;万海同;余道军-.四重逆转录重组酶聚合酶等温扩增技术快速联检四种难鉴别蚊媒病毒的效果观察)[J].浙江医学,2022(10):1042-1049

四重逆转录重组酶聚合酶扩增,Copies

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