典型文献
不同外周血单个核细胞分离方法对流式细胞术分析结果的影响
文献摘要：
目的 探讨3种外周血单个核细胞(PBMC)分离方法对后续流式细胞术分析结果的影响,并比较PBMC冻存前后流式细胞术分析结果.方法 2019年5月,选择四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室6位体检健康的工作人员为受试对象,采集每位受试者外周血15 mL,平均分为3份,分别采用Ficoll离心法、羟乙基淀粉(HES)沉降法和HES+Ficoll法分离PBMC.显微镜下观察3种方法分离所得PBMC的形态,并采用细胞计数仪进行细胞计数.分离所得PBMC于冻存前和冻存6个月后行流式细胞术分析,计算PBMC中淋巴细胞所占比例、淋巴细胞中活细胞(FVS780荧光强度小于102为活细胞)所占比例(细胞存活率)和活细胞中CD4+T细胞数与CD8+T细胞数的比值(CD4+T/CD8+T).结果 3种分离方法得到的PBMC形态均一致.与其他2种分离方法相比,HES沉降法分离得到的PBMC除淋巴细胞外还有部分红细胞.HES沉降法所得PBMC数量显著多于Ficoll离心法与HES+Ficoll法(P<0.05);Ficoll离心法所得PBMC数量高于Ficoll+HES法(P<0.05).冻存前和冻存6个月后,Ficoll离心法、HES沉降法和Ficoll+HES法得到的PBMC的存活率比较差异均无统计学意义(P>0.05);HES沉降法得到的PBMC中淋巴细胞比例显著低于Ficoll离心法和HES+Ficoll法(P<0.05);Ficoll离心法与HES+Ficoll法所得到的PBMC中淋巴细胞比例比较差异无统计学意义(P>0.05);Ficoll离心法、HES沉降法与Ficoll+HES法得到的存活细胞中CD4+T/CD8+T比值比较差异无统计学意义(P>0.05).3种方法分离得到的PBMC冻存后淋巴细胞存活率均低于冻存前(P<0.05),PBMC中淋巴细胞比例均高于冻存前(P<0.05);存活细胞中CD4+T/CD8+T比值与冻存前比较差异无统计学意义(P>0.05).结论 HES沉降法分离得到的PBMC纯度(混有少量红细胞)不如其他2种方法,但其操作更为简便.且无论是冻存前的PBMC还是冻存6个月后的细胞,流式细胞术分析3种方法分离得到的PBMC的结果无统计学差异,因此,HES沉降法适用于抗凝全血的PBMC分离提取.
文献关键词：
Ficoll离心;羟乙基淀粉;外周血单个核细胞;流式细胞术
中图分类号：
作者姓名：
牟大超;吴沙沙;周轶
作者机构：
四川大学华西医院人类疾病和免疫治疗研究室,四川 成都 610041
文献出处：
引用格式：
[1]牟大超;吴沙沙;周轶-.不同外周血单个核细胞分离方法对流式细胞术分析结果的影响)[J].新乡医学院学报,2022(05):470-473
A类：
HES+Ficoll,FVS780,Ficoll+HES
B类：
外周血单个核细胞,细胞分离方法,流式细胞术,PBMC,续流,四川大学,华西医院,人类疾病,免疫治疗,治疗研究,研究室,受试对象,每位,平均分,离心法,羟乙基淀粉,降法,显微镜下,后行,活细胞,荧光强度,细胞存活率,CD4+T,CD8+T,均一,分红,比值比,混有,如其,果无,统计学差异,抗凝全血,分离提取
AB值：
0.143699
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