典型文献
原代滑膜细胞培养及同时提取微量总RNA和蛋白质的方法在体外细胞分子生物学研究中的应用
文献摘要：
目的:建立从少量原代培养滑膜细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法.方法:向5×105原代成纤维样滑膜细胞(FLS)中加入0.3 ml的TRIzolTM试剂经过改良抽提总RNA;同时将抽提总RNA剩下的中下两相,用异丙醇-盐酸胍-无水乙醇抽提蛋白质.另外将FLS细胞标本分别采用经典的异硫氰酸胍-苯酚-氯仿一步法(AGPC)和分子克隆实验手册介绍的十二烷基硫酸钠(SDS)-裂解法抽提总RNA和蛋白质作为对照.检测所提总RNA和蛋白质的纯度、完整性和生物学行为功能.结果:AGPC和TRIzolTM试剂提取的总RNA的18 S带和28 S带清晰可见,且28 S带比18 S带亮度强2～3倍,带与带之间无拖尾现象,A260/A280值均在1.8以上,含量18.5μg以上.检测两种方法所提总RNA的IL-1β和TNF-αmRNA表达,显示丰度高且两种方法的差异不明显.用总RNA抽提剩下的中下两相提取的蛋白质,经十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)检测,蛋白质分离效果好,无杂质和蛋白降解,A280/A260值均在1.8以上,含量80μg以上.免疫印迹法对白介素-1β和肿瘤坏死因子-α蛋白质分析,均可见一条清晰的特异带,与常规SDS裂解液提取的蛋白质结果相同.结论:本研究建立了从FLS原代细胞中同时提取微量总RNA和总蛋白质的方法,得率高,纯度好,具有化学完整性和生物反应能力.
文献关键词：
微量;原代培养;成纤维样滑膜细胞;提取;RNA;蛋白质
中图分类号：
作者姓名：
熊翱;熊仁平;彭艳;黄治中;陈惺;江旭;曹福洋;许建中
作者机构：
郑州大学第一附属医院骨科,郑州450052;中国人民解放军陆军特色医学中心陆军特殊职业疾病防控研究室,重庆400042
文献出处：
引用格式：
[1]熊翱;熊仁平;彭艳;黄治中;陈惺;江旭;曹福洋;许建中-.原代滑膜细胞培养及同时提取微量总RNA和蛋白质的方法在体外细胞分子生物学研究中的应用)[J].中华骨与关节外科杂志,2022(04):276-282
A类：
TRIzolTM,AGPC
B类：
细胞培养,同时提取,体外细胞,分子生物学研究,原代培养,总蛋白质,成纤维样滑膜细胞,FLS,ml,抽提,剩下,异丙醇,盐酸胍,无水乙醇,硫氰酸,苯酚,氯仿,一步法,分子克隆,手册,十二烷基硫酸钠,SDS,生物学行为,行为功能,清晰可见,亮度,拖尾,A260,A280,聚丙烯酰胺凝胶电泳,PAGE,蛋白质分离,分离效果,无杂质,蛋白降解,免疫印迹法,白介素,原代细胞,得率,化学完整性,反应能力
AB值：
0.284766
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