目的:探究miR-23b通过调节转化生长因子-β1(transforming growth factorβ,TGF-β1)/SMAD同源物3(mothers against decapentaplegic homolog 3,SMAD3)信号通路对博莱霉素(bleomycin,BLM)所致大鼠肺纤维化(pulmonary fibrosis,PF)及自噬水平的影响.方法:采用BLM诱导大鼠PF模型,并分为对照组、PF组、agomiR-阴性对照(negative control,NC)组和agomiR-23b组.通过生物信息学预测及双荧光素酶实验验证miR-23b对SMAD3的调控作用;用苏木精-伊红(hematoxylin-eosin stain,HE)和Masson染色观察大鼠肺组织病理学改变,免疫组织化学染色观察大鼠肺组织I型胶原蛋白(collagen-I)、α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、酵母自噬相关基因6(autophagy related protein 6,ATG6)的哺乳动物同源体(beclin-1)、轻链3-Ⅱ(light chain 3-II,LC3-II)的表达,实时荧光定量聚合酶链式反应(real-time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测肺组织中miR-23b和SMAD3 mRNA的表达,蛋白质印迹法检测肺组织中TGF-β1、SMAD3和SMAD7的蛋白质表达.将人肺成纤维细胞(HFL1)分为对照组、PF组、agomiR-NC组和agomiR-23b组;用RT-qPCR检测各组细胞中miR-23b和SMAD3 mRNA的表达,Transwell小室实验检测各组细胞迁移和侵袭能力,透射电镜观察各组细胞自噬泡的形成.结果:与对照组相比,PF组和agomiR-NC组PF程度更严重;肺组织SMAD3 mRNA以及collagen-I、α-SMA、TGF-β1和SMAD3蛋白表达水平明显升高,miR-23b以及beclin-1、LC3-II和SMAD7蛋白表达水平明显降低;HFL1细胞SMAD3 mRNA表达水平以及迁移和侵袭能力提高,自噬活性降低(均P<0.05).与PF组相比,agomiR-23b组大鼠PF程度得到有效改善;肺组织collagen-I、α-SMA、TGF-β1和SMAD3蛋白表达水平明显降低,beclin-1、LC3-II和SMAD7蛋白表达水平明显升高;HFL1细胞迁移、侵袭能力降低,自噬活性增强(P<0.05).结论:MiR-23b通过靶向抑制SMAD3的表达抑制肺成纤维细胞的迁移,降低PF程度,并提高自噬活性;其机制可能与调控TGF-β1/SMAD3通路有关.

miR-23b;转化生长因子-β1/SMAD家族成员3;博莱霉素;肺纤维化;自噬

谢健龙;区泳芳;陈永华;常岸芷;缪辉来

广东医科大学附属医院心胸外科,广东 湛江 524001;广东医科大学附属医院病理诊断 与研究中心,广东 湛江 524001;广东医科大学附属第二医院肝胆外科,广东 湛江 524003;东莞寮步医院普外科,广东 东莞 523400

临床与病理杂志

[1]谢健龙;区泳芳;陈永华;常岸芷;缪辉来-.MiR-23b通过调节TGF-β1/SMAD3信号通路对博莱霉素所致大鼠肺纤维化及自噬水平的影响)[J].临床与病理杂志,2022(06):1263-1274

MiR,23b,TGF,SMAD3,博莱霉素,肺纤维化,转化生长因子,transforming,growth,mothers,against,decapentaplegic,homolog,bleomycin,BLM,pulmonary,fibrosis,PF,agomiR,negative,control,NC,双荧光素酶,苏木,木精,伊红,hematoxylin,eosin,stain,HE,Masson,肺组织病理,组织病理学,免疫组织化学染色,胶原蛋白,collagen,平滑肌肌动蛋白,smooth,muscle,actin,酵母,自噬相关基因,autophagy,related,protein,ATG6,哺乳动物,beclin,轻链,light,chain,II,LC3,实时荧光定量聚合酶链式反应,real,fluorescent,quantitative,polymerase,reaction,qPCR,蛋白质印迹法,SMAD7,蛋白质表达,人肺成纤维细胞,HFL1,Transwell,小室,实验检测,细胞迁移和侵袭,侵袭能力,透射电镜,电镜观察,细胞自噬,蛋白表达水平,能力提高,靶向抑制,表达抑制

0.297023