目的 探讨二甲双胍通过蛋白激酶B(Akt)/糖原合成酶激酶(GSK)3β/β-连环蛋白(β-Catenin)信号通路对白细胞介素(IL)-1β 诱导的人椎间盘髓核细胞凋亡的影响.方法 体外培养人椎间盘髓核细胞,并分为IL-1β 组、IL-1β+低浓度二甲双胍(40μg/ml)组、IL-1β+中浓度二甲双胍(80μg/ml)组、IL-1β+高浓度二甲双胍(160μg/ml)组、IL-1β+高浓度二甲双胍+MK2206(Akt/GSK3β/β-Catenin通路抑制剂,10μmol/L)组,另正常培养人椎间盘髓核细胞作为Control组.MTT法检测各组细胞活性;hochest 33258法检测各组细胞凋亡;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组细胞炎症因子IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α水平;GFP-LC3法检测各组细胞自噬水平;Western印迹检测各组细胞Akt/GSK3β/β-Catenin通路相关蛋白、凋亡相关蛋白(caspase-3、Bax、Bcl-2)、自噬相关蛋白(LC3B、Atg7、Beclin1、p62)及椎间盘退变相关蛋白(aggre-can、collagenⅡ)表达水平.结果 与Control组比较,IL-1β 诱导后人椎间盘髓核细胞活性显著降低(P<0.05),大部分细胞核被染成亮蓝色,凋亡率和自噬体数明显增加(P<0.05),促凋亡蛋白(caspase-3、Bax)、自噬促进蛋白(LC3B、Atg7、Beclin1)、β-Catenin蛋白表达水平及炎症因子(IL-6、TNF-α)表达量明显升高(P<0.05),抗凋亡蛋白(Bcl-2)、自噬抑制蛋白(p62)和aggrecan、collagenⅡ蛋白表达水平及Akt、GSK3β磷酸化水平明显降低(P<0.05).低、中、高浓度二甲双胍的加入使上述各项指标与模型组呈相反趋势,且表现为浓度依赖性(P<0.05).而MK2206刺激后,Akt、GSK3β磷酸化水平降低(P<0.05),β-Catenin蛋白表达水平升高(P<0.05),并逆转二甲双胍对IL-1β诱导的人椎间盘髓核细胞的保护作用(P<0.05).结论 二甲双胍通过激活Akt/GSK3β/β-Catenin信号通路促进IL-1β 诱导的人椎间盘髓核细胞增殖,并抑制其凋亡、炎症反应及自噬,进而减缓椎间盘退变进程.

二甲双胍;蛋白激酶B;白细胞介素-1β;人椎间盘髓核细胞;凋亡

董军立;贾诚谦;姚宪宝;苗二芽;蔡毅;杨夏晴

华中科技大学同济医学院附属武汉中心医院疼痛科,湖北 武汉 430014

中国老年学杂志

[1]董军立;贾诚谦;姚宪宝;苗二芽;蔡毅;杨夏晴-.二甲双胍通过Akt/GSK3β/β-Catenin信号通路对人椎间盘髓核细胞凋亡的影响)[J].中国老年学杂志,2022(17):4304-4310

人椎间盘髓核细胞,+MK2206,hochest

二甲双胍,Akt,GSK3,Catenin,蛋白激酶,糖原合成,合成酶,连环蛋白,体外培养,ml,通路抑制剂,Control,MTT,细胞活性,酶联免疫吸附试验,细胞炎症因子,GFP,细胞自噬,凋亡相关蛋白,caspase,Bax,Bcl,自噬相关蛋白,LC3B,Atg7,Beclin1,p62,椎间盘退变,变相,collagen,细胞核,染成,成亮,亮蓝,蓝色,凋亡率,自噬体,促凋亡蛋白,蛋白表达水平,抗凋亡,aggrecan,磷酸化,浓度依赖性,平降

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