目的 探究人脐带间充质干细胞(hUC-MSC)外泌体携带微小RNA-204(miR-204)对心肌缺血再灌注(I/R)小鼠模型巨噬细胞极化的影响及作用机制.方法 hUC-MSC分离、培养并鉴定,检测成脂、成骨分化能力;超速离心法分离hUC-MSC外泌体,纳米颗粒跟踪分析软件、透射电镜、Western blot实验鉴定外泌体中CD81、CD63、肿瘤易感基因101(Tsg101)及钙联蛋白(Calnexin)的表达;将hUC-MSC分为hUC-MSC组、miR-204模拟物组及阴性对照组,qRT-PCR法检测各组细胞及其外泌体中miR-204的表达;将C57BL/6J小鼠随机分为假手术组、I/R组、hUC-MSC外泌体组、阴性对照组和miR-204模拟物组,除假手术组外均通过结扎左前降支动脉构建I/R模型,超声心电图检测小鼠心功能,HE染色观察小鼠心肌组织病理学情况,ELISA检测心肌组织中白细胞介素(IL)1β、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、精氨酸酶1(Arg-1)及IL-10水平;分离小鼠心肌组织巨噬细胞,流式细胞术检测巨噬细胞CD11c和CD206蛋白表达情况,ELISA检测巨噬细胞IL-1β、TNF-α、Arg-1及IL-10水平.结果 hUC-MSC具有成脂、成骨分化能力,外泌体鉴定成功;与阴性对照组比较,miR-204模拟物组hUC-MSC及其外泌体中miR-204表达水平显著增加(P<0.001,P<0.001);与假手术组比较,I/R组小鼠左心室舒张末期直径(LVEDD)(P<0.001)、左心室收缩末期直径(LVESD)(P<0.001)、心肌损伤评分(P<0.001)、IL-1β(P<0.001)、TNF-α(P<0.001)、CD11c(P<0.001)水平显著增加,左心室射血分数(LVEF)(P<0.001)、左心室缩短分数(LVFS)(P<0.001)、Arg-1(P<0.001)、IL-10(P<0.001)、CD206(P<0.001)水平显著降低;与I/R组比较,hUC-MSC外泌体组LVEDD(P<0.001)、LVESD(P<0.001)、心肌损伤评分(P<0.001)、IL-1β(P<0.001)、TNF-α(P=0.010)、CD11c(P<0.001)水平显著降低,LVEF(P<0.001)、LVFS(P<0.001)、Arg-1(P<0.001)、IL-10(P=0.028)、CD206(P=0.022)水平显著性增加;与阴性对照组比较,miR-204模拟物组LVEDD(P<0.001)、LVESD(P<0.001)、心肌损伤评分(P=0.001)、IL-1β(P=0.048)、TNF-α(P<0.001)、CD11c(P=0.007)水平显著降低,LVEF(P<0.001)、LVFS(P<0.001)、Arg-1(P<0.001)、IL-10(P=0.001)、CD206(P=0.001)水平显著增加.结论 miR-204过表达的hUC-MSC外泌体可抑制I/R小鼠模型巨噬细胞向M1型极化,促进其向M2型极化.

人脐带间充质干细胞;微小RNA-204;巨噬细胞;心肌缺血再灌注;极化

袁改利;杨东伟;罗莉梅;文雯

郑州大学附属郑州中心医院心肺功能科,郑州450001

中国医学科学院学报

[1]袁改利;杨东伟;罗莉梅;文雯-.人脐带间充质干细胞外泌体携带微小RNA-204对心肌缺血再灌注小鼠模型巨噬细胞极化的影响及机制探究)[J].中国医学科学院学报,2022(05):785-793

钙联蛋白

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