目的 利用定点突变技术突变Pdm/09 H1N1流感病毒的NA基因119位点并拯救,研究其生物特性.方法 利用重叠PCR的方法进行定点突变,再应用反向遗传学体系中的pBD-NA质粒后在293T细胞中转染拯救流感病毒,通过血凝试验和RT-PCR方法鉴定病毒拯救结果,通过细胞学和攻毒试验研究该位点变异的生物学意义.结果 定点突变测序结果显示,突变的pBD-NA质粒核苷酸第336位由A突变为G,使氨基酸位点发生E(核苷酸:GAA)到G(核苷酸:GGA)的变化,而其他位置的氨基酸均未发生改变.拯救的病毒转染后的细胞悬液接种MDCK细胞连续传代3代后突变毒株(rMT)血凝效价为27,亲本毒株(rWT)为26.神经氨酸酶的二级结构预测结果显示,rMT与rWT相比,Alpha Helix分值明显下降,均值同比下降约为10.62％,经突变后的rMT Alpha Helix结构分值表现为下降趋势.用rWT和rMT病毒攻毒BABL/c小鼠后第3天的小鼠肺组织、鼻甲骨、脾和肾的病毒滴度,rMT攻毒组均比rWT攻毒组高,鼻甲组织与肺脏中的病毒滴度相比差异不显著,脾和肾的差异显著.结论 NA119位点的定点突变对病毒的复制能力没有明显影响,突变株对BABL/c小鼠的致病力有一定增强,临床症状明显,神经氨酸酶活性下降.

猪流感;H1N1;定点突变;病毒拯救

程倩;孔子荣;李三木;李献;Muhammad Junaid;张书祥;何奇松;熊毅;孙文博;颜健华

广西大学医学院,南宁530000;广西大学动物科学技术学院,南宁 530000;广西壮族自治区动物疫病预防控制中心,南宁530000;山东省农业科学院畜牧兽医研究所,济南 250100

中国人兽共患病学报

[1]程倩;孔子荣;李三木;李献;Muhammad Junaid;张书祥;何奇松;熊毅;孙文博;颜健华-.猪源Pdm/09 H1N1甲流NA定点突变拯救毒株的生物特性研究)[J].中国人兽共患病学报,2022(10):890-897,905

Pdm,rWT,NA119

猪源,H1N1,甲流,毒株,生物特性,定点突变技术,流感病毒,反向遗传学,pBD,质粒,293T,血凝,病毒拯救,过细,细胞学,攻毒试验,该位,点变异,生物学意义,氨基酸位点,GAA,GGA,病毒转染,细胞悬液,MDCK,连续传代,rMT,效价,亲本,神经氨酸酶,二级结构,结构预测,Alpha,Helix,BABL,肺组织,鼻甲,甲骨,病毒滴度,甲组,肺脏,复制能力,突变株,致病力,猪流感

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