典型文献
茉莉酸信号转录抑制关键组分JAZ与NINJA互作体系建立及复合体结晶条件筛选
文献摘要：
[目的]本文旨在建立JAZ与NINJA蛋白离体和活体互作以及2个蛋白复合体晶体筛选的体系,并获得2个蛋白复合体晶体.[方法]采用酵母双杂交和双分子荧光互补法用于活体条件下JAZ与NINJA蛋白互作区域的验证;在离体条件下,通过氢氘交换质谱(HDX)和Alpha Screen验证JAZ与NINJA蛋白的互作区域并进一步筛选2个蛋白互作的最小区域;使用原核(大肠杆菌)表达系统、亲和层析和凝胶过滤层析纯化等手段获得NINJA截短蛋白.将NINJA截短蛋白与JAZ多肽按照物质的量比为1:1.5混合孵育一段时间,通过坐滴结晶方法进行复合体结晶,最终获得复合体晶体.[结果]成功创建了JAZ与NINJA离体和活体互作体系;获得JAZ多肽与NINJA(342～406)的复合体晶体的条件分别是0.2 mol·L-1 CaCl2·2H2O、0.1 mol·L-1 BIS-Tris(pH6.5)、45％2-甲基-2,4-戊二醇与0.2 mol·L-1醋酸铵、0.1 mol·L-1 Tris(pH8.5)、45％2-甲基-2,4-戊二醇.[结论]JAZ蛋白ZIM结构域的TIFY基序和羧基端与NINJA(342～406)是JAZ与NINJA蛋白互作所必需的;JAZ蛋白ZIM结构域是JAZ同源和异源互作所必需的;成功获得了JAZ与NINJA复合体晶体.
文献关键词：
茉莉酸;JAZ;NINJA;ZIM结构域;互作;晶体学
中图分类号：
作者姓名：
曹晓蔓;张亚光;张峰
作者机构：
南京农业大学植物保护学院,江苏 南京210095
文献出处：
引用格式：
[1]曹晓蔓;张亚光;张峰-.茉莉酸信号转录抑制关键组分JAZ与NINJA互作体系建立及复合体结晶条件筛选)[J].南京农业大学学报,2022(01):86-93
A类：
NINJA
B类：
茉莉酸信号,转录抑制,关键组分,JAZ,体系建立,复合体,结晶条件,条件筛选,离体,活体,体晶,晶体筛选,酵母双杂交,双分子荧光互补,互补法,蛋白互作,氢氘交换,HDX,Alpha,Screen,最小区域,原核,大肠杆菌,表达系统,亲和层析,凝胶过滤层析,层析纯化,截短蛋白,多肽,物质的量比,孵育,结晶方法,CaCl2,2H2O,BIS,Tris,pH6,醋酸,pH8,ZIM,结构域,TIFY,基序,羧基端,异源,晶体学
AB值：
0.33668
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