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yihE对肠炎沙门菌生物学特性影响的研究
文献摘要：
为研究丝氨酸-苏氨酸激酶(yihE)在肠炎沙门菌致病中的作用,本研究利用λ-Red同源重组技术构建了肠炎沙门菌C50336(WT)yihE基因缺失突变株C50336ΔyihE(KO)、基因回补株C50336ΔyihiE/pBR322-yihE(RS),测定了 WT、KO、RS菌株的生长特性、生化特性、运动能力,结果显示,与WT相比,KO株的生长速度、运动能力均无明显差异;但半乳糖酸盐利用、葡萄糖苷酶、葡萄糖醛酸酶等指标发生变化.体外模拟并检测各种应激条件下肠炎沙门菌的生长情况,结果显示,与WT相比,KO株抗多种应激能力均有不同程度下降;通过试管法、微量法等分析评估3株菌生物被膜(BF)的形成能力,另外,将各菌株分别接种至含刚果红和荧光增白剂的培养基,通过观察各菌落形态分析其BF成分的变化情况,结果显示,与WT菌株相比,KO株BF形成能力下降了约50％,但BF主要的组成成分卷毛蛋白和纤维素无明显变化.对3种菌株耐药性和KO、WT株毒力因子携带情况经RT-qPCR进行检测,结果显示,与WT相比,KO株对喹诺酮类、头孢曲松的敏感性提高;且csgA、bscA、flgG、sipB、sodc毒力基因的转录水平差异较大,而其他毒力基因的转录水平差异较小.利用KO、WT株菌株分别感染小鼠进行致病力试验,结果显示,WT株的LD50为1.2×105 cfu,KO株的LD50为1.12×106 cfu,毒力下降了约10倍.利用Over-lap PCR方法突变yihE蛋白217位天冬氨酸,利用蛋白质丝氨酸/苏氨酸激酶检测试剂盒检测其激酶活性,结果显示yihE蛋白突变后其激酶活性下降了约30％,表明217位天冬氨酸对yihE蛋白的活性非常关键.本研究证实yihE参与了肠炎沙门菌的多个生物学过程,且yihE基因的缺失能够使肠炎沙门菌的毒力下降,该结果为进一步研究沙门菌致病机制奠定了基础.
文献关键词：
肠炎沙门菌;丝氨酸-苏氨酸激酶;致病力;抗应激能力;生物被膜
中图分类号：
作者姓名：
刘畅;张雪佳;王利丽;白和平;王苗;李浩;刘勃兴;史秋梅;吴同垒;张志强
作者机构：
河北科技师范学院河北省预防兽医学重点实验室,河北 秦皇岛 066004
文献出处：
引用格式：
[1]刘畅;张雪佳;王利丽;白和平;王苗;李浩;刘勃兴;史秋梅;吴同垒;张志强-.yihE对肠炎沙门菌生物学特性影响的研究)[J].中国预防兽医学报,2022(04):369-376
A类：
yihE,C50336,yihiE,bscA,flgG,sipB,sodc
B类：
肠炎沙门菌,生物学特性,丝氨酸,苏氨酸,研究利用,Red,同源重组,重组技术,技术构建,WT,基因缺失,缺失突变,突变株,KO,基因回补,pBR322,RS,生长特性,生化特性,运动能力,生长速度,半乳糖,乳糖酸,葡萄糖苷酶,葡萄糖醛酸,体外模拟,生长情况,试管法,微量法,分析评估,生物被膜,BF,形成能,刚果红,荧光增白剂,通过观察,菌落形态,形态分析,组成成分,分卷,卷毛,毛蛋,耐药性,毒力因子,qPCR,喹诺酮类,头孢曲松,csgA,毒力基因,转录水平,致病力,LD50,cfu,Over,lap,天冬氨酸,检测试剂盒,激酶活性,常关,生物学过程,失能,致病机制,抗应激能力
AB值：
0.283222
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