目的 对前期从织锦芋螺毒液中发现的芋螺毒素Tx3h进行合成鉴定和活性研究.方法 通过固相多肽合成法(SPPS)人工合成了 Tx3h的线性肽,采用一步氧化法对线性肽进行氧化折叠,获得了 Tx3h的2个二硫键连接不同的折叠肽异构体(Tx3h-a和Tx3h-b),并对其氧化折叠条件进行了优化.通过部分还原及烷基化反应,结合MALDI-TOF-MS/MS分析,鉴定了 Tx3h-a和Tx3h-b的二硫键连接方式.采用双电极电压膜片钳技术测试了Tx3h-a和Tx3h-b对α4β2和α3β2 nAChRs的抑制作用.结果 通过氧化折叠条件的优化,Tx3h-a和Tx3h-b的产率分别从7.5％和9.3％提高到23.7％和22.4％.Tx3h-a和Tx3h-b的二硫键连接方式分别鉴定为Ⅰ-Ⅴ、Ⅱ-Ⅵ、Ⅲ-Ⅳ和 Ⅰ-Ⅵ、Ⅱ-Ⅳ,Ⅲ-Ⅴ.在 10 μmol/L 终浓度下,Tx3h-a 和 Tx3h-b 对 α4β2 nAChR 的阻断率分别为(35.06±4.90)％、(34.85±3.02)％,对α3β2 nAChR无阻断作用.结论 通过对芋螺毒素Tx3h折叠肽的合成、二硫键连接鉴定以及乙酰胆碱受体活性检测,发现二硫键连接为Ⅰ-V,Ⅱ-Ⅵ,Ⅲ-Ⅳ和Ⅰ-Ⅵ,Ⅱ-Ⅳ,Ⅲ-Ⅴ的Tx3h折叠肽对α4β2 nAChR有更好的选择性,为其后续研究开发奠定了基础.

富含二硫键的芋螺毒素;二硫键连接;一步氧化;乙酰胆碱受体

鞠双;颜清慧;刘思懿;张雨;罗素兰;符影

海南大学热带生物资源教育部重点实验室,药学院,海南海口 570228;广西大学医学院,广西南宁530004

中国海洋药物

[1]鞠双;颜清慧;刘思懿;张雨;罗素兰;符影-.芋螺毒素Tx3h的合成鉴定和活性的研究)[J].中国海洋药物,2022(04):27-35

Tx3h,富含二硫键的芋螺毒素

织锦,毒液,活性研究,固相多肽合成,成法,SPPS,人工合成,一步氧化法,氧化折叠,二硫键连接,异构体,烷基化反应,MALDI,TOF,连接方式,膜片钳技术,nAChRs,无阻,乙酰胆碱受体,活性检测,研究开发

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