目的 通过体外内实验明确具核梭杆菌(Fn)对结直肠肿瘤干细胞(CSCs)恶性潜能的影响并初步探讨相关分子机制.方法 采用流式细胞术检测结直肠癌细胞系HCT-116、HT-29、LOVO、SW480和SW620中CD133+CD44+细胞亚群比例,并选择比例最高的细胞系进行筛选.采用细胞计数试剂盒8(CCK-8)、克隆形成及Transwell实验分别检测Fn干预后CD133+CD44+细胞亚群增殖、克隆形成、侵袭及迁移能力的改变.将裸鼠随机分为Fn干预组和对照组,构建裸鼠皮下移植瘤模型,明确Fn干预后CD133+CD44+细胞亚群体内成瘤能力的改变.采用蛋白质印迹法检测Fn干预后CD133+CD44+细胞亚群中上皮标志物、间质标志物及细胞增殖指标的表达水平.结果 流式细胞术检测发现HCT-116细胞系中CD133+CD44+细胞亚群所占比例最高,为(87.59±0.37)％,因此选择该细胞系用于后续实验.CCK-8实验结果表明,Fn干预(F组别=156.53,P组别<0.001)及生长天数(F天数=410.79,P天数<0.001)的主效应差异有统计学意义,且两者联合有协同交互作用(F组别×天数=19.83,P组别×天数<0.001).Fn干预组的克隆形成数目多于对照组,t=19.11,P<0.001.Fn干预组的细胞侵袭和迁移数量分别为(115.67±8.14)和(131.00±6.56)个,均高于对照组,均P<0.05.Fn干预组及对照组的皮下移植瘤体积分别为(1.66±0.57)和(0.69±0.23)cm3,重量分别为(1.66±0.40)和(0.58±0.24)g,均P<0.05.免疫组化实验结果显示,Fn干预组皮下移植瘤中Ki-67染色阳性率〔(80.60±5.86)％〕高于对照组〔(60.40±11.99)％〕,t=3.39,P=0.016.蛋白质印迹实验显示,Fn干预组较对照组E-cadherin表达水平下调,而N-cadherin、Snail及增殖细胞核抗原的表达水平上调.结论 Fn通过调控上皮细胞间质转化促进CD133+CD44+结直肠癌细胞亚群的体内外恶性潜能,因此,靶向Fn有望成为抑制结直肠CSCs进而预防肿瘤复发转移的新策略.

具核梭杆菌;肿瘤干细胞;上皮细胞间质转化;结直肠癌;生物标志物

扬州大学附属医院肿瘤科,江苏 扬州 225000

[1]郭怀娟;茅静贤;陶明阳;朱思源;王颖;严雪冰-.具核梭杆菌介导的上皮细胞间质转化对结直肠癌干细胞恶性潜能的影响)[J].中华肿瘤防治杂志,2022(17):1256-1263

CD133+CD44+

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