目的:观察铜绿假单胞菌（PA）分泌蛋白Pec1通过抑制小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）自噬而影响其对铜绿假单胞菌清除效应。方法:体外予Pec1蛋白、PAO1灭活菌、PAO1灭活菌+ Pec1蛋白、PAO1活菌、Pec1蛋白敲除活菌（PAO1Δpec1）与小鼠肺泡巨噬细胞（MH-S）共培养，实时定量逆转录聚合酶链反应（qRT-PCR）检测自噬标志物微管相关蛋白轻链3（LC3）的mRNA表达水平；Western blot检测自噬标志物LC3蛋白表达水平；透射电镜下观察MH-S细胞自噬小体的形成；通过细菌探针荧光原位杂交技术（FISH）联合激光扫描共聚焦显微镜检测MH-S细胞胞内活菌、MH-S细胞破壁后菌落计数，计算MH-S细胞胞内杀菌效率。LC3的mRNA及蛋白表达水平、透射电镜下MH-S细胞自噬小体的数量、MH-S细胞胞内杀菌效率呈正态分布，组间比较采用两独立样本t检验。结果:Pec1蛋白组、PAO1灭活菌+ Pec1蛋白组和PAO1活菌组自噬标志物LC3的mRNA表达水平分别为（0.624 ± 0.071）、（0.614 ± 0.069）和（0.752 ± 0.098），分别低于对照组（1.071 ± 0.147）（t = 2.723、P = 0.044）、PAO1灭活菌组（1.098 ± 0.144）（t = 2.950、P = 0.028）和Pec1蛋白敲除活菌组（1.214 ± 0.229）（t = 2.816、P = 0.037），差异均有统计学意义；Pec1蛋白组、PAO1灭活菌+ Pec1蛋白组和PAO1活菌组蛋白LC3-Ⅱ/ LC3-Ⅰ比值分别为（0.396 ± 0.063）、（0.384 ± 0.070）和（0.771 ± 0.080），分别低于对照组（1.000 ± 0.043）（t = 8.130、P < 0.001）、PAO1灭活菌组（0.947 ± 0.055）（t = 7.573、P < 0.001）和Pec1蛋白敲除活菌组（1.080 ± 0.185）（t = 4.166、P = 0.002），差异均有统计学意义；Pec1蛋白组、PAO1灭活菌+ Pec1蛋白组和PAO1活菌组自噬小体数量分别为（1.330 ± 0.577）、（1.670 ± 0.577）和（1.330 ± 0.577），分别低于对照组（4.330 ± 0.577）（t = 5.692、P < 0.001）、PAO1灭活菌组（4.670 ± 0.577）（t = 5.692、P < 0.001）和Pec1蛋白敲除活菌组（4.000 ± 1.000）（t = 5.060、P < 0.001），差异均有统计学意义。通过细菌探针FISH联合激光扫描共聚焦显微镜检测MH-S胞内活菌，计算出MH-S细胞对PAO1及PAO1Δpec1的胞内杀菌效率分别为（39.3 ± 3.4）%和（82.2 ± 1.3）%，两组差异具有统计学意义（t = 4.908、P = 0.005）；通过菌落计数计算出MH-S细胞对PAO1及PAO1Δpec1的胞内杀菌效率分别为（18.4 ± 4.1）%和（42.2 ± 1.4）%，差异具有统计学意义（t = 8.576、P < 0.001）。结论:Pec1可能通过抑制MH-S细胞自噬削弱对铜绿假单胞菌清除。

铜绿假单胞菌;Pec1;肺泡巨噬细胞;自噬

张长文;林少清;吕敏捷;金霄;朱常军;冯旰珠

210011　南京市，南京医科大学第二附属医院呼吸与危重症学科

中华实验和临床感染病杂志（电子版）

[1]张长文;林少清;吕敏捷;金霄;朱常军;冯旰珠-.铜绿假单胞菌分泌蛋白Pec1抑制巨噬细胞自噬及影响铜绿假单胞菌清除效应初步观察)[J].中华实验和临床感染病杂志（电子版）,2022(06):370-376

Pec1,pec1

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