目的:研究富含微小核糖核酸（miR）-132-3p的神经干细胞（NSC）释放的外泌体（EX）对缺氧且无糖（OGD）损伤的内皮细胞功能的保护作用。方法:利用SPF级C57BL/6新生小鼠20只，原代培养NSC，采用装载miR-132-3p的慢病毒感染NSC获得NSCmiR-132-3p，同时采用装载Scramble序列的慢病毒感染NSC获得NSCNC。提取NSCNC和NSCmiR-132-3p释放的EX，分别获得NSC-EX和NSC-EXmiR-132-3p。将EX与OGD受损小鼠脑微血管内皮细胞（mBMEC）共培养，采用血管形成检测试剂盒、CCK8试剂盒、划痕实验、流式细胞技术、实时荧光定量逆转录聚合酶链反应和Western blotting分别检测mBMEC血管形成能力、增殖能力、迁移能力、凋亡、miR-132-3p表达和磷酸化细胞外调节激酶（pERK1/2）水平；丝裂原活化的细胞外信号调节激酶1/2（MEK1/2）通路抑制剂（PD0325901）处理检测MEK1/2-ERK1/2通路对NSC-EXmiR-132-3p功能的调控作用。采用Student’s t检验法比较上述各指标的组间差异。结果:NSC-EX处理显著增加OGD诱导下mBMEC细胞的增殖能力（0.34±0.04 vs 0.23±0.04）、迁移能力[（238.45±18.72）μm vs（175.38±12.53）μm]、血管形成能力[（9±2）条 vs（3±1）条]及ERK1/2磷酸化水平（0.27±0.02 vs 0.07±0.01），减少细胞凋亡[（22.5±3.1）% vs（35.7±4.7）%]，差异均具有统计学意义（t=2.98，P=0.042；t=4.92，P=0.008；t=4.65，P=0.011；t=16.09，P=0.001；t=6.05，P=0.004）。与NSC-EX处理相比，NSC-EXmiR-132-3p处理更有效增加mBMEC细胞的增殖能力（0.45±0.06 vs 0.34±0.04）、迁移能力[（346.51±19.28）μm vs（238.45±18.72）μm]、血管形成能力[（15±3）条 vs（9±2）条]、miR-132-3p表达（5.76±0.58 vs 2.85±0.39）和ERK1/2磷酸化水平（0.47±0.03 vs 0.27±0.02），减少细胞凋亡[（15.8±2.9）% vs（22.5±3.1）%]，差异均具有统计学意义（t=2.97，P=0.041；t=6.27，P=0.003；t=3.05，P=0.038；t=7.16，P=0.002；t=9.69，P=0.001；t=3.06，P=0.04）。PD0325901处理降低NSC-EXmiR-132-3p对细胞增殖能力（0.28±0.03 vs 0.45±0.06）、迁移能力[（193.21±18.93）μm vs（346.51±19.28）μm]、血管形成能力[（6±2）条 vs（15±3）条]、凋亡[（29.4±3.4）% vs（15.8±2.9）%]和ERK1/2磷酸化水平（0.16±0.01 vs 0.47±0.03）的作用效果，差异均具有统计学意义（t=5.05，P=0.007；t=9.23，P=0.005；t=4.67，P=0.009；t=5.82，P=0.004；t=17.14，P=0.001）。结论:miR-132-p通过激活MEK1/2-ERK1/2信号通路显著增强NSC-EX对OGD损伤的mBMEC功能的保护作用。

神经干细胞;外泌体;微小核糖核酸;脑微血管;内皮细胞

马晓瑭;王艳;李素青;刘金花;石雨萌;潘群文

524001　广东湛江，广东医科大学附属医院神经病学研究所　广东省衰老相关心脑疾病重点实验室

中华脑血管病杂志（电子版）

[1]马晓瑭;王艳;李素青;刘金花;石雨萌;潘群文-.富含miR-132-3p的神经干细胞释放的外泌体激活MEK1/2/-ERK1/2通路改善缺氧无糖诱导的脑微血管内皮细胞损伤)[J].中华脑血管病杂志（电子版）,2022(03):172-181

NSCmiR,NSCNC,EXmiR,mBMEC,PD0325901

3p,神经干细胞,细胞释放,外泌体,MEK1,无糖,血管内皮细胞损伤,微小核糖核酸,OGD,内皮细胞功能,SPF,C57BL,新生小鼠,原代培养,装载,慢病毒感染,Scramble,小鼠脑微血管内皮细胞,共培养,用血,血管形成,检测试剂盒,CCK8,划痕实验,流式细胞技术,逆转录聚合酶链反应,blotting,形成能,迁移能力,磷酸化,细胞外调节激酶,pERK1,丝裂原活化的细胞外信号调节激酶,通路抑制剂,Student,检验法,细胞的增殖,细胞增殖能力

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