目的 评价基于噬菌体展示技术的羟基磷灰石结合肽的解吸附特征.方法 采用成品羟基磷灰石(hydroxyapatite,HAP)作为结合底物,通过X射线衍射(X-ray diffraction,XRD)对其进行物相鉴定,提取噬菌体DNA测序读取展示肽的序列,扩增制备目标序列YSLHWGE(YSL)的单克隆储液,以肽库中随机挑选的序列VTDSKPK(VTD)为阴性对照;滴度测试测定投入回收比,免疫荧光法验证目标序列的标靶亲和力.参照标准淘选方案,在不同pH值(7.5、6.5、5.5、4.5)缓冲洗脱液中分析目标序列的解吸附特征.结果 YSL和VTD的单克隆储液扩增后滴度均达到1011 pfu/10μL,符合后续实验要求.测序结果得到目标序列和随机序列分别为YSL和VTD.通过重复3次滴度测试计算投入回收比发现,目标序列YSL与HAP的亲和度较高,投入回收比为随机肽VTD投入回收比的17.5倍.这种结合亲和力也通过免疫荧光实验得以验证,结果显示YSL组羟基磷灰石粉末被荧光点亮的面积比例和平均吸光度分别为(71.98±2.30)％ 和(0.10090±0.00544),均显著高于VTD组的(49.95±2.28)％(P<0.01)和(0.04637±0.00117)(P<0.01);发现在不同pH值环境中,YSL解吸附释放的噬菌体数量占原吸附总量的比例均高于随机肽VTD解吸附的比例(P<0.01).结论 羟基磷灰石结合肽序列YSLHWGE对结合底物羟基磷灰石有较好的亲和力且具有一定的随环境pH值变化的缓释能力.

羟基磷灰石;羟基磷灰石结合肽;蛋白质吸附;滴度测试

邓鑫;李瑛傑;魏蔚;杨焰;马净植;谢三祥

华中科技大学同济医学院附属同济医院口腔医学中心,武汉 430030;华中科技大学协和深圳医院口腔科,深圳 518000

华中科技大学学报（医学版）

[1]邓鑫;李瑛傑;魏蔚;杨焰;马净植;谢三祥-.报道一条具有pH敏感解吸附特征的羟基磷灰石结合肽序列)[J].华中科技大学学报（医学版）,2022(02):218-223

羟基磷灰石结合肽,YSLHWGE,VTDSKPK,滴度测试

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