[目的]探究环状RNA circ_0018478调控心肌成纤维细胞纤维化表型的作用和可能机制.[方法]RT-qPCR检测健康器官捐献者(n=18)和心衰(n=28)患者心肌中circ_0018478及其宿主基因含E3泛素蛋白连接酶4的HECT和RLD结构域(HERC4)的表达水平.荧光原位杂交(FISH)实验和核质RNA定量检测circ_0018478的细胞分布情况,放线菌素D干预实验和核糖核酸外切酶(RNase R)消化实验检测circ_0018478的RNA稳定性.过表达腺病毒介导的circ_0018478时,分别在RNA和蛋白水平检测乳小鼠心肌成纤维细胞(mCFs)中如Ⅰ型和Ⅲ型胶原等纤维化相关基因表达的影响.利用EdU染色和Trans-well细胞迁移实验鉴定circ_0018478对mCFs增殖和迁移能力的影响.质谱shot-gun分析circ_0018478可能翻译蛋白的肽段序列.利用小干扰RNA(siRNA)抑制HERC4-193表达,检测对circ_0018478调控mCFs纤维化表型的影响.[结果]在心衰病人心肌中,相较于无显著表达差异的宿主基因HERC4,环形RNA circ_0018478表达显著增加.FISH和核质分离实验结果证实circ_0018478主要定位于心肌细胞胞质中.放线菌素D和RNase R消化实验证实circ_0018478具有典型的RNA稳定性.过表达circ_0018478可抑制mCFs的增殖、迁移和纤维化相关基因的表达.质谱shot-gun和Western blot检测结果提示circ_0018478可翻译预期的HERC4-193蛋白.过表达circ_0018478和HERC4-193可一致地抑制mCFs的纤维化表型,而抑制HERC4-193表达可有效减弱circ_0018478抑制mCFs中纤维化相关基因表达的作用(P<0.05).[结论]Circ_0018478通过翻译蛋白HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用.

心肌纤维化;circ_0018478;翻译;心肌成纤维细胞

丰嘉欣;郭继深;梁俣;姜佳雪;李晖;徐金东;方咸宏;单志新

华南理工大学生物科学与工程学院,广东广州510006;广东省人民医院广东省临床药理学重点实验室,广东广州510080;南方医科大学第二临床医学院,广东广州510280;广东省心血管病研究所心内科,广东广州510080;广东省人民医院检验科,广东广州510080;广东省人民医院麻醉科,广东广州510080

中山大学学报（医学科学版）

[1]丰嘉欣;郭继深;梁俣;姜佳雪;李晖;徐金东;方咸宏;单志新-.Circ_0018478通过编码HERC4-193发挥抑制心肌成纤维细胞纤维化表型的作用)[J].中山大学学报（医学科学版）,2022(06):995-1004

HERC4,mCFs

Circ,心肌成纤维细胞,细胞纤维化,circ,可能机制,qPCR,健康器,器官捐献者,宿主基因,E3,泛素,连接酶,HECT,RLD,结构域,荧光原位杂交,FISH,定量检测,放线菌素,干预实验,核糖核酸,核酸外切酶,RNase,化实验,实验检测,过表达,腺病毒,水平检测,相关基因表达,EdU,Trans,well,细胞迁移,迁移实验,增殖和迁移,迁移能力,shot,gun,段序列,小干扰,siRNA,心衰病,表达差异,核质分离,心肌细胞,可抑制,blot,心肌纤维化

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