旨在探究鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因(MTTPL)生物学特性及其表达调控机制,为进一步探讨其在鸡肝脂质代谢中的生物学功能奠定基础.本研究首先采用PCR和测序技术,克隆MTTPL cDNA序列;利用在线软件对MTTPL蛋白结构域、三维空间结构及系统进化树进行分析;构建pcDNA3.1-MTTPL-EGFP过表达载体,通过与内质网标签蛋白的表达载体DsRed-λ共转染鸡肝癌细胞系(LMH)细胞,对MTTPL进行亚细胞定位;分别采集不同周龄卢氏绿壳蛋鸡(1日龄、1周龄、10周龄、30周龄每个周龄各8只)组织样,采用荧光定量PCR分析MTTPL基因和鸡微粒体甘油三酯转运蛋白基因(MTTP)的时空表达谱;然后用0.5、1和2 mg·kg-1体重浓度的17β-雌二醇分别处理海兰褐鸡(每组20只)12和24 h后,分析雌激素对肝MTTPL和MTTP表达的影响;最后用1、50、和100 nmol·L-117β-雌二醇及雌激素受体拮抗剂分别处理鸡胚肝原代细胞12 h(每组3个重复),研究雌激素调控MTTPL基因表达的作用机制.结果表明,鸡MTTPL的CDS区全长为2 646 bp,可编码881个氨基酸,与人和鸡MTTP拥有共同的祖先;定位于细胞内质网;鸡MTTPL和MTTP具有与人MTTP相同的功能域,且三维结构相似度偏差较小,分别为0.090和0.064;MTTPL基因在鸡肝和肾组织中高表达,MTTP在鸡肝、肾和小肠中高表达;在肝中,MTTPL和ApoB的表达水平随周龄的增加均显著上升(P＜0.05),而MTTP的表达仅在10周前随周龄增加显著升高(P＜0.05),而在产蛋前(10周龄)和产蛋期(30周龄)无显著变化(P＞0.05);在17β-雌二醇处理鸡12和24 h时后,MTTPL及ApoB在肝中均显著上调表达(P＜0.05),而MTTP在高浓度处理时表达量显著下调(P＜0.05),在低浓度时无显著变化;与对照组相比,雌激素可显著上调鸡胚肝原代细胞中ApoB和MT-TPL的表达(P＜0.05),而MTTP表达水平无显著变化;与雌激素处理组相比,雌激素及受体ERα拮抗剂MPP共处理组MTTPL基因表达水平显著降低(P＜0.05);与MPP和雌激素共处理组相比,ERα和ERβ受体拮抗剂ICI和TAM处理组MTTPL基因表达水平无显著变化.综上所述,鸡MTTPL位于内质网中,具有与人MTTP相似的功能结构域;MTTPL和M1TTP均在肝中相对高表达,且MTTPL在产蛋期鸡肝的表达显著高于产蛋前期,而MTTP无显著变化.雌激素可通过与ERα受体结合调控鸡MTTPL的表达,而MTTP不受雌激素调控.表明MTTPL可能在鸡产蛋期肝脂质代谢中发挥重要作用.

鸡;MTTP;MTTPL;脂质代谢;雌激素;脂蛋白

徐春林;曹玉珠;夏天;贾其辉;王丹丹;郑航;田亚东;康相涛;蒋瑞瑞;刘小军;李红

河南农业大学动物科技学院,郑州450046;河南省家禽育种国际联合实验室,郑州450046;河南省鸡种质资源创新与利用重点实验室,郑州450046

畜牧兽医学报

[1]徐春林;曹玉珠;夏天;贾其辉;王丹丹;郑航;田亚东;康相涛;蒋瑞瑞;刘小军;李红-.鸡微粒体甘油三酯转运蛋白样基因生物学特性及表达调控)[J].畜牧兽医学报,2022(09):2900-2911

MTTPL,卢氏绿壳蛋鸡,M1TTP

微粒体,甘油三酯转运,转运蛋白,生物学特性,表达调控,调控机制,鸡肝,肝脂,脂质代谢,生物学功能,蛋白结构域,三维空间,系统进化树,pcDNA3,EGFP,过表达载体,内质网,标签蛋白,DsRed,共转染,肝癌细胞,细胞系,LMH,亚细胞定位,周龄,日龄,时空表达谱,雌二醇,别处,nmol,雌激素受体拮抗剂,鸡胚,原代细胞,激素调控,CDS,全长,bp,可编,祖先,功能域,三维结构,结构相似度,肾组织,小肠,ApoB,产蛋期,醇处理,激素处理,ER,MPP,共处理,基因表达水平,ICI,TAM,综上所述,功能结构

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