典型文献
两种基因编码的探针特异性检测小鼠脑5-HT信号的比较
文献摘要:
目的:五羟色胺(5-HT)对中枢神经系统发挥着重要的调控作用,其功能失调与许多精神类疾病密切相关,因此开发能实时灵敏检测5-HT的工具对研究此类疾病及研发靶向药物至关重要.最近新开发的iSeroSnFR和GRAB5-HT1.0两类5-HT荧光探针,具有细胞特异性、反应灵敏以及高时空分辨率等显著优势,已经成为深入探究5-HT作用机制的有力工具.本研究旨在探究荧光探针iSeroSnFR和GRAB5-HT1.0哪种能更有效地检测5-HT递质释放及动态变化,从而为后续优化5-HT荧光探针和利用这一有力工具解析神经疾病中的递质异常提供新思路.方法:将iSeroSnFR或GRAB5-HT1.0探针的基因序列插入到Sindbis病毒表达载体,然后把病毒分别转染到培养的小鼠离体脑片的海马CA1区,比较两种探针在神经元中的表达差异;并检测其对外源性5-HT药物诱导产生的荧光反应.另外,将上述病毒转染到急性小鼠脑片中缝核(DRN)区,给与电刺激检测两种探针响应内源5-HT释放的荧光信号差异.结果:在转染iSeroSnFR的海马CA1区神经元中均有荧光表达,但细胞边界不清晰;而转染了 GRAB5-HT1.0 的神经元细胞膜上表达有强烈的绿色荧光信号.用1μM5-HT处理培养的小鼠脑片海马CA1神经元时,iSeroSnFR探针没有明显的荧光强度变化;而GRAB5-HT1.0探针产生的荧光强度显著增强;用1 mM5-HT处理时,iSeroSnFR探针产生一定强度的荧光反应,但响应幅度弱于GRAB5-HT1.0探针.另外,利用上述病毒转染急性小鼠脑片DRN区,通过电刺激诱导内源性5-HT释放,发现仅在表达GRAB5-HT1.0探针的DRN神经元中观察到显著增强的荧光反应;而iSeroSnFR探针几乎未产生明显荧光变化.结论:在小鼠脑中,GRAB5-HT1.0荧光探针对外源性及内源性的5-HT的亲和力更高、灵敏度更强.
文献关键词:
基因编码探针;GPCR;PBPs;5-HT
中图分类号:
作者姓名:
张坤;王建刚;王静怡;罗静;范蕾;程傲冰;韩燕飞
作者机构:
上海交通大学医学院药理学与化学生物学系 上海200025;新乡医学院生理学与病理生理学系 河南新乡453003;广州市第一人民医院麻醉科 广东广州510180
文献出处:
引用格式:
[1]张坤;王建刚;王静怡;罗静;范蕾;程傲冰;韩燕飞-.两种基因编码的探针特异性检测小鼠脑5-HT信号的比较)[J].现代生物医学进展,2022(14):2601-2606
A类:
iSeroSnFR,GRAB5,mM5,基因编码探针
B类:
特异性检测,五羟色胺,中枢神经系统,功能失调,精神类疾病,时灵,靶向药物,HT1,荧光探针,细胞特异性,高时空分辨率,显著优势,哪种,递质释放,神经疾病,基因序列,Sindbis,病毒表达载体,离体,脑片,海马,CA1,表达差异,外源性,药物诱导,光反应,病毒转染,中缝核,DRN,给与,电刺激,荧光信号,光表,神经元细胞,细胞膜,荧光强度,强度变化,内源性,光变,亲和力,GPCR,PBPs
AB值:
0.222583
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