为研究三疣梭子蟹(Portunus trituberculatus)的P-糖蛋白(P-glycoprotein,P-gp)的转运功能,利用RACE扩增技术克隆得到abcb1(ATP-binding cassette transporter subfamily b1)基因全长序列,命名为Ptabcb1,cDNA全长为4923 bp,开放阅读框(ORF)为3522 bp,编码1172个氨基酸,具有2个疏水性的跨膜区(TMD)和2个核苷酸结合区(NBD),符合ABC转运蛋白的基本结构特征.序列比对结果显示,Ptabcb1基因与脊尾白虾(Exopalaemon carinicauda)abcb1基因同源性最高(73.32％).系统进化树分析表明,Ptabcb1氨基酸序列与脊尾白虾紧密聚为一支.组织表达分布结果显示,Ptabcb1基因在所有组织中均有表达,其中在肝胰腺中的表达量最高.采用荧光原位杂交技术,利用合成目的基因Ptabcb1的杂交探针,通过荧光染色,追踪到Ptabcb1基因主要在肝胰腺的细胞质中表达.利用实时荧光定量技术探究肌注20 mg·kg-1、40 mg·kg-1和80 mg·kg-1不同浓度的氟苯尼考(FLR)对Ptabcb1基因在三疣梭子蟹体内转录表达的影响;以及用10μM维拉帕米(verapamil,VER)注射三疣梭子蟹1 h后,再进行40 mg·kg-1 FLR的注射处理,探究FLR与VER联合注射给药对三疣梭子蟹Ptabcb1基因转录表达的影响以及转运活性的变化.结果显示,FLR在24 h内以浓度依赖的方式,通过促进Ptabcb1基因的转录上调,显著促进PtP-gp蛋白在转录水平上的转运活性;同时发现40 mg·kg-1 FLR与VER联合注射处理组与单独注射40 mg·kg-1 FLR处理组相比,在12 h之内强烈抑制FLR的外排,导致PtP-gp蛋白转运活性降低;12 h之后,PtP-gp蛋白转运活性逐渐恢复到对照组水平.此外,还发现三疣梭子蟹具有保守的P-gp蛋白介导的防御系统.研究结果可为进一步了解P-gp蛋白介导甲壳类动物解毒的分子防御机制提供依据.

三疣梭子蟹;P-糖蛋白;氟苯尼考;转运活性

徐垚;邵慧鑫;高保全;李健;蔡月凤;任宪云

江苏海洋大学海洋科学与水产学院,江苏省海洋生物资源与环境重点实验室/江苏省海洋生物技术重点实验室,江苏连云港 222005;中国水产科学研究院黄海水产研究所,农业农村部海洋渔业可持续发展重点实验室,山东青岛 266071;青岛海洋科学与技术试点国家实验室-海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室,山东青岛 266237;水产科学国家级实验教学示范中心,上海 201306

海洋渔业

[1]徐垚;邵慧鑫;高保全;李健;蔡月凤;任宪云-.三疣梭子蟹P-gp蛋白在氟苯尼考代谢中的功能研究)[J].海洋渔业,2022(05):521-534

abcb1,Ptabcb1,PtP

三疣梭子蟹,gp,氟苯尼考,功能研究,Portunus,trituberculatus,糖蛋白,glycoprotein,运功,RACE,ATP,binding,cassette,transporter,subfamily,基因全长序列,cDNA,bp,开放阅读框,ORF,疏水性,TMD,NBD,ABC,转运蛋白,基本结构,序列比对,脊尾白虾,Exopalaemon,carinicauda,同源性,系统进化树分析,氨基酸序列,组织表达,表达分布,有组织,肝胰腺,荧光原位杂交技术,目的基因,荧光染色,细胞质,定量技术,技术探究,肌注,FLR,转录表达,维拉帕米,verapamil,VER,注射给药,药对,基因转录,转运活性,转录水平,外排,白介,防御系统,甲壳类,类动物,解毒,防御机制

0.309446