本研究以海水养殖鱼类半滑舌鳎(Cynoglossus semilaevis)为研究对象,克隆了白细胞介素12(IL-12)的p35a亚基和p40c亚基的基因编码区序列,编码区长度分别为651bp和984 bp.系统进化树分析显示,半滑舌鳎的p35a和p40c分别与其他鱼类对应的基因聚为一支.氨基酸同源性分析显示,p35a 与红鳍东方鲀(Takifugu rubripes)相似性最高,p40c 与三棘刺鱼(Gasterosteus aculeatus)相似性最高,分别为52.04％和48.67％.组织表达分析显示,p35a在鳃、脑、心和卵巢中表达量较高,p40c在肝、脾、鳃和心中表达量较高.通过哈维氏弧菌(Vibrio harveyi)感染实验,分析了半滑舌鳎p35a、p40c及其相关基因(ifn-γ和il-10)在哈维氏弧菌感染过程中的表达模式,p35a在脾中,48h表达显著上升(P＜0.05),之后表达逐渐下降;在肝和肠中,72 h表达显著上升.p40c在脾、肝中,6h表达显著上升;在肾中,48h产生上调;在肠中,6h开始上调,并在48h上升至最高点.ifn-γ在肝和肠中,均在p35a表达上调之前显著升高,在脾中晚于p35a上调表达;il-10在肝、脾、肾、肠中表达趋势中均与p40c的表达趋势相反.将半滑舌鳎淋巴细胞过表达p35a和p40c基因后,检测了受不同浓度脂多糖(LPS)刺激后干扰素(ifn-γ)、肿瘤坏死因子(tnf-α和tnf-β)等免疫相关细胞因子的表达变化.结果显示,p35a、p40c能够显著提高tnf-α在LPS刺激下的表达水平.上述结果表明,IL-12的p35a亚基和p40c亚基能够响应哈维氏弧菌对半滑舌鳎的刺激,过表达p35a、p40c能够通过诱导tnf-α基因的表达来参与机体的免疫应答.研究结果可为IL-12作为半滑舌鳎抗哈维氏弧菌疫苗佐剂的开发提供理论基础.

半滑舌鳎;免疫应答;白细胞介素12;哈维氏弧菌

张志华;冯博;朱腾飞;郝先才;王倩;邵长伟;王洪岩

上海海洋大学水产与生命学院 上海 201306;中国水产科学研究院黄海水产研究所青岛海洋科学与技术试点国家实验室海洋渔业科学与食物产出过程功能实验室 山东 青岛 266071

渔业科学进展

[1]张志华;冯博;朱腾飞;郝先才;王倩;邵长伟;王洪岩-.半滑舌鳎白细胞介素12的p35a和p40c亚基在哈维氏弧菌感染下的表达和调控分析)[J].渔业科学进展,2022(03):12-23

p35a,p40c,651bp,Gasterosteus

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