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典型文献
3种不同核酸提取方法对新型冠状病毒检测的影响
文献摘要:
目的:研究磁珠法、离心柱法及一步法对新型冠状病毒(2019-nCoV)核酸提取效率的差异。方法:2021年3月5日,在南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院核酸采样室采集本科室员工咽拭子标本10份,将阳性质控品混入其中,作为模拟阳性标本。用磁珠法、离心柱法及一步法分别提取模拟阳性样本及其稀释样本RNA、人源性标本及其稀释样本RNA,用微量紫外分光光度计测量核酸的纯度( A260/ A280比值)及浓度,并进行荧光定量PCR扩增实验,比较其循环阈值(CT)和提取效率。用3种方法提取模拟弱阳性标本,比较其扩增后的CT值差异。服从正态分布的计量资料以 xˉ±s表示,组间比较采用 t检验,多组间比较采用单因素方差分析。 结果:磁珠法、离心柱法、一步法提取的2019-nCoV核酸均能扩增出阳性结果。磁珠法与一步法提取的RNA扩增CT值差异无统计学意义( t=?0.995, P=0.376)。离心柱法提取的RNA较另外2种方法提取的RNA扩增后CT值小,离心柱法、磁珠法、一步法提取的模拟阳性样本扩增后ORF1ab基因的CT值分别为29.28±0.06、30.82±0.14、29.79±0.01,差异有统计学意义( F=11.196, P=0.041);E基因的CT值分别为28.52±0.40、27.33±0.78、27.38±0.13,差异有统计学意义( F=3.407, P=0.169);N基因的CT值分别为28.61±1.02、27.24±0.20、27.25±0.47,差异有统计学意义( F=2.880, P=0.020);离心柱法、磁珠法、一步法提取的人源性标本扩增后人源基因CT值分别为19.68±0.36、20.14±0.06和20.58±0.49,差异有统计学意义( F=4.904, P=0.048)。人源性标本稀释2倍即对扩增人源基因CT值有影响,未稀释标本较稀释2倍标本CT值较小,相差2.95±0.22,差异有统计学意义( t=?3.025, P=0.039)。一步法、磁珠法、离心柱法提取时间分别为(15.00±1.50)、(20.00±1.50)和(40.00±5.5)min,差异有统计学意义( F=688, P=0.027)。 结论:磁珠法、离心柱法及一步法均可用于2019-nCoV核酸提取,离心柱法提取效率较磁珠法及一步法高。
文献关键词:
新型冠状病毒;核酸类;临床实验室技术
作者姓名:
周慧聪;王子铭;胡悦;张洁;朱艳婷;黄梅;严孝岭;虞伟
作者机构:
南京大学医学院附属泰康仙林鼓楼医院检验科,南京 210046
引用格式:
[1]周慧聪;王子铭;胡悦;张洁;朱艳婷;黄梅;严孝岭;虞伟-.3种不同核酸提取方法对新型冠状病毒检测的影响)[J].中华检验医学杂志,2022(04):393-398
A类:
B类:
核酸提取,新型冠状病毒检测,磁珠法,一步法,nCoV,提取效率,南京大学,学医,鼓楼,核酸采样,采样室,科室,咽拭子,质控品,混入,阳性标本,取模,阳性样本,紫外分光光度计,计测,A260,A280,扩增实验,循环阈值,弱阳性,服从,正态分布,单因素方差分析,样本扩增,ORF1ab,增人,提取时间,核酸类,临床实验室技术
AB值:
0.268495
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